| 查看: 2184 | 回复: 20 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lybio金虫 (正式写手)
|
[交流]
不需要加入引物进行PCR的问题
|
||
| 分别用两对引物扩增出两条目的DNA片断，这两条链5端和3端有20个互补碱基。现在以扩增出的这两条DNA链，互为模板和引物，不需要另加引物，扩增一段长的链。想请教有经验的人，反应体系一般是怎样的？谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有6人回复
-
延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有23人回复
lybio
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1315.9
- 散金: 20
- 帖子: 399
- 在线: 80.9小时
- 虫号: 284636
- 注册: 2006-10-14
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
★ ★
asr(金币+2,VIP+0):恭喜！^_^
asr(金币+2,VIP+0):恭喜！^_^
|
大家好！感谢大伙提供的帮助,已经P出来了. 以下是我做的PCR条件,供大家参考讨论 25uL反应体系: 纯化的两条DNA片断各0.5uL(用PFU酶P) taq酶 (0.25U/L) 2uL PCR Buffer 2.5uL dNTP 2ul 加灭菌DD水至25uL PCR条件: 94℃ 5min , 94℃ 30s , 50℃ 2min, 72℃ 4min 循环8次, 最后延伸5min. 后往管中加入0.5ul 引物P1和P4,怕酶失活过多,再加 0.5uL. PCR条件:94℃ 5min , 94℃ 30s , 56℃ 30s, 72℃ 4min 循环20次, 最后延伸5min. 跑电泳后,目的片断很亮,还有少量未延伸的两条DNA片断. 但有拖带现象(>目的片断KB数),以及在目的片断下面(<目的片段KB数)有阴影(窄的,不亮区域),不知道是什么原因? [ Last edited by lybio on 2008-2-29 at 21:37 ] |
17楼2008-02-29 21:36:15
2楼2008-01-18 18:40:59
lybio
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1315.9
- 散金: 20
- 帖子: 399
- 在线: 80.9小时
- 虫号: 284636
- 注册: 2006-10-14
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2008-01-18 23:32:26
skkyy88888
铜虫 (著名写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 142
- 散金: 1521
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 2340
- 在线: 216.2小时
- 虫号: 277762
- 注册: 2006-09-09
- 专业: 生物化学
4楼2008-01-19 11:44:17
