24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1929  |  回复: 20
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 不需要加入引物进行PCR的问题

分别用两对引物扩增出两条目的DNA片断,这两条链5端和3端有20个互补碱基。现在以扩增出的这两条DNA链,互为模板和引物,不需要另加引物,扩增一段长的链。想请教有经验的人,反应体系一般是怎样的?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ypan

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
这个有点象重组PCR,我去年暑假就用这种方法做过,并且获得成功!
反应体系和普通PCR一样,我用的聚合酶是Taq plus I
反应程序为:
94度预变性10分钟
94变性30秒;
65退火30秒;
72延伸30秒。
72继续延伸5分钟。
总共进行约15个循环。
退火温度的确定可以用oligo把重叠部分当成引物来确定,当然还是要靠经验!
不过感觉你的重叠部分太短了,建议重叠互补区域30个碱基!
祝你成功!
14楼2008-01-22 20:13:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

weiwei1

木虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):楼主又发问了.请你再辛苦一下.
你是说,两条片段完全互补,要变成一条双链DNA,是吗?
直接把两条片段混合,放在PCR仪内,95度5分钟,然后关掉PCR仪,过夜即可。
需要配退火缓冲液。
2楼2008-01-18 18:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

不是,这两条链分别有900KB和1000K,而且是已经扩增出来的双链。其中一条链(由引物P1和P2扩增)的5‘末端和另一条链(由引物P3和P4扩增)3’末端有20个碱基互补(因为P2和P3是互补的两条引物),现在就想在25UL体系里加入这两条链,taq酶,底物等,而不加其他引物来扩增长的为1900KB(900+1000)的DNA链,想知道反应体系一般是怎样的?
3楼2008-01-18 23:32:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

这种PCR叫什么呢?我还没听过,但比较有意思,而我有点怀疑可行性。退火的时候两条只有20BP的链会结合吗?与自身的互补链结合不是更有优势吗?
4楼2008-01-19 11:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-24 6/300 2026-03-29 20:45 by 无际的草原
[考研] 08工科求调剂286 +3 tgs_001 2026-03-28 3/150 2026-03-29 18:29 by 1018329917
[考研] 环境工程 085701,267求调剂 +6 minht 2026-03-29 6/300 2026-03-29 16:21 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +11 北道巷 2026-03-24 11/550 2026-03-29 08:31 by fmesaito
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 312,生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
请填处理意见