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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 不需要加入引物进行PCR的问题

分别用两对引物扩增出两条目的DNA片断,这两条链5端和3端有20个互补碱基。现在以扩增出的这两条DNA链,互为模板和引物,不需要另加引物,扩增一段长的链。想请教有经验的人,反应体系一般是怎样的?谢谢!
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pxmyz

银虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
无引物PCR应该称作DNA体外同源重组PCR(DNA shuffling),是专门用于进行突变育种。它首先要用DNase I消化功能相同的一组基因片段(A),从而产生随机小片段(B),然后提纯后用无引物PCR(经变性后可互为引物)重新装配这些小片段成完整的大片段。
但楼主说的那个问题不属于无引物PCR,可能涉及到重组PCR,你只是要把两个片段通过PCR的方法连接起来,而没有要突变的意思,对吧?这两个片段虽然有一段互补区,但仍需要一段和两条引物均有互补的区域,也就是说的搭桥引物。好好看看怎么设计重组PCR引物,祝成功。
Ican,Ido.
11楼2008-01-22 10:49:26
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weiwei1

木虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):楼主又发问了.请你再辛苦一下.
你是说,两条片段完全互补,要变成一条双链DNA,是吗?
直接把两条片段混合,放在PCR仪内,95度5分钟,然后关掉PCR仪,过夜即可。
需要配退火缓冲液。
2楼2008-01-18 18:40:59
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lybio

金虫 (正式写手)

不是,这两条链分别有900KB和1000K,而且是已经扩增出来的双链。其中一条链(由引物P1和P2扩增)的5‘末端和另一条链(由引物P3和P4扩增)3’末端有20个碱基互补(因为P2和P3是互补的两条引物),现在就想在25UL体系里加入这两条链,taq酶,底物等,而不加其他引物来扩增长的为1900KB(900+1000)的DNA链,想知道反应体系一般是怎样的?
3楼2008-01-18 23:32:26
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

这种PCR叫什么呢?我还没听过,但比较有意思,而我有点怀疑可行性。退火的时候两条只有20BP的链会结合吗?与自身的互补链结合不是更有优势吗?
4楼2008-01-19 11:44:17
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