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phdandmd

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2014-01-17 22:34:28
phdandmd: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,回复很具体,我会在接下来的实验里摸索,有疑惑时再请教! 2014-01-19 20:40:47
1,细胞密度取决于你用什么转染试剂,毒性大的可能需要细胞密度大些,无双抗转染,转染后几小时换液。具体应该参考转染试剂的protocol
2,应该是转染后时间对蛋白或者rna表达影响比较大,一般24小时之后基本都表达了。当然你细胞太少也会影响检测。
3,转染效率当然是越高越好,但不同细胞的被转染能力不一样,如果你想每个细胞都过表达,可以考虑用lentivirus感染,基本可能达到100%。不同的rna和蛋白的稳定性不一样,所以应该没有确定的数据可以告诉你过表达会多出多少倍。既然是做流式分选,哪怕只有10%的细胞被转染上了,也可以被分选出来
2楼2014-01-17 19:53:04
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