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1楼 2014-01-17 19:22:21

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新虫 (小有名气)

应助: 39 (小学生)
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专业: 细胞信号转导

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2014-01-17 22:34:28
phdandmd: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，回复很具体，我会在接下来的实验里摸索，有疑惑时再请教！ 2014-01-19 20:40:47

1,细胞密度取决于你用什么转染试剂，毒性大的可能需要细胞密度大些，无双抗转染，转染后几小时换液。具体应该参考转染试剂的protocol
2，应该是转染后时间对蛋白或者rna表达影响比较大，一般24小时之后基本都表达了。当然你细胞太少也会影响检测。
3，转染效率当然是越高越好，但不同细胞的被转染能力不一样，如果你想每个细胞都过表达，可以考虑用lentivirus感染，基本可能达到100%。不同的rna和蛋白的稳定性不一样，所以应该没有确定的数据可以告诉你过表达会多出多少倍。既然是做流式分选，哪怕只有10%的细胞被转染上了，也可以被分选出来

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2楼2014-01-17 19:53:04

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