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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条带很淡不好胶回收怎么办
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yuren2009

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议回收后二次PCR
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学习使你立于不败之地
11楼2014-01-15 21:14:10
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 寂寞又美好 at 2014-01-15 16:06:54
不需要稀释吗，我刚把第一轮跑的稀释了800倍做模板进行PCR但效果还是不好。...

教你个更直接有效的办法，拿5-10ul你的PCR产物做模板。做50ul体系，再做15-20个循环保证亮瞎你的双眼
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12楼2014-01-15 21:31:08
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wangguosing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by yuer9809 at 2014-01-15 21:31:08
教你个更直接有效的办法，拿5-10ul你的PCR产物做模板。做50ul体系，再做15-20个循环保证亮瞎你的双眼...

真的吗

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13楼2014-01-16 04:22:51
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hoajie

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再p一次，Tm值升高1到2℃

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14楼2014-01-16 09:07:50
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寂寞又美好

金虫 (小有名气)
嗯，终于搞出来了，谢谢各位前辈了！
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等待.....
15楼2014-01-16 10:35:05
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hollyjiang

铜虫 (初入文坛)
1,如果是模板量不够，就加大模板浓度，加大反应体积或设置几管重复，再做一次PCR；
2,如果是模板量足够，就尝试不同的退火温度，条带淡可能是扩增效率不高；
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一定要签名嘛
16楼2014-01-20 16:56:15
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ccttss1

新虫 (初入文坛)
用你PCR的产物，继续做一次PCR如果还是少的话，就扩大PCR的量，然后再切胶回收。
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17楼2014-01-22 10:46:34
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郭兜兜

银虫 (小有名气)
做个巢式

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18楼2014-01-22 22:36:22
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艰苦温度

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 寂寞又美好 at 2014-01-16 10:35:05
嗯，终于搞出来了，谢谢各位前辈了！

回收产物重新pcr吗？
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19楼2014-01-23 09:59:18
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baihaer

铜虫 (初入文坛)
可以适当降低退火温度提高PCR产物的量，另外再看看你引物设计的是否合适，如果目的片段GC含量太高也会有相似问题，需要含合适的GC buffer，最简单的方法其实是多做几组平行然后同一个柱子胶回增加PCR产物，或者提高PCR的cycle数（最好不要超过30个cycle，一般在25左右，cycle越多越容易发生突变）
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没有SB的事，只有SB的人
20楼2014-01-23 20:55:44
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