24小时热门版块排行榜    

查看: 3506  |  回复: 20

yuren2009

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议回收后二次PCR
学习使你立于不败之地
11楼2014-01-15 21:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer9809

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 寂寞又美好 at 2014-01-15 16:06:54
不需要稀释吗,我刚把第一轮跑的稀释了800倍做模板进行PCR但效果还是不好。...

教你个更直接有效的办法,拿5-10ul你的PCR产物做模板。做50ul体系,再做15-20个循环保证亮瞎你的双眼
12楼2014-01-15 21:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangguosing

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by yuer9809 at 2014-01-15 21:31:08
教你个更直接有效的办法,拿5-10ul你的PCR产物做模板。做50ul体系,再做15-20个循环保证亮瞎你的双眼...

真的吗

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-01-16 04:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hoajie

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
再p一次,Tm值升高1到2℃

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-01-16 09:07:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞又美好

金虫 (小有名气)

嗯,终于搞出来了,谢谢各位前辈了!
等待.....
15楼2014-01-16 10:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hollyjiang

铜虫 (初入文坛)

1,如果是模板量不够,就加大模板浓度,加大反应体积或设置几管重复,再做一次PCR;
2,如果是模板量足够,就尝试不同的退火温度,条带淡可能是扩增效率不高;
一定要签名嘛
16楼2014-01-20 16:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccttss1

新虫 (初入文坛)

用你PCR的产物,继续做一次PCR如果还是少的话,就扩大PCR的量,然后再切胶回收。
17楼2014-01-22 10:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郭兜兜

银虫 (小有名气)

做个巢式

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-01-22 22:36:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艰苦温度

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 寂寞又美好 at 2014-01-16 10:35:05
嗯,终于搞出来了,谢谢各位前辈了!

回收产物重新pcr吗?
19楼2014-01-23 09:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baihaer

铜虫 (初入文坛)

可以适当降低退火温度提高PCR产物的量,另外再看看你引物设计的是否合适,如果目的片段GC含量太高也会有相似问题,需要含合适的GC buffer,最简单的方法其实是多做几组平行然后同一个柱子胶回增加PCR产物,或者提高PCR的cycle数(最好不要超过30个cycle,一般在25左右,cycle越多越容易发生突变)
没有SB的事,只有SB的人
20楼2014-01-23 20:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 寂寞又美好 的主题更新
信息提示
请填处理意见