应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助做过3×Flag肽洗脱目的蛋白的大侠
31/1返回列表
查看: 2247  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 求助做过3×Flag肽洗脱目的蛋白的大侠 已有1人参与

3×Flag肽不能洗脱带3×Flag标签的靶蛋白。
    Sigma的3×Flag肽，按说明用TBS溶解至5 mg/ml，分装冻存在-20℃。
    洗脱液的3×Flag浓度200 μg/ml，室温（约15℃）与珠子（蛋白G-Flag抗体-靶蛋白）孵育20 min，洗3 - 4次，基本不能洗脱珠子上的靶蛋白分别用过PBST、PBS、TBS，但只成功洗脱过一次，而且似乎跟这些缓冲液的选择无关。【可以确定珠子上有大量靶蛋白，基本使珠子满载】
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-11 17:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wufeifei2417

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jurkat.1640: 金币+2, ★有帮助 2014-02-27 16:16:39
jurkat.1640: 金币+3 2014-04-14 15:40:27
我的一些小建议哈~

1.Sigma的3×Flag肽可以配成至25 mg/ml，这样可以保存的较久

2.洗脱时最好还是在2-8℃，30min以上，如果还不行可以加大次数、增大浓度、延长时间。

我也在做flag融合蛋白的纯化，也是洗不下来，用sds-page的loading buffer煮一下珠子WB信号倒是很强……

good luck
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-27 16:10:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wufeifei2417

新虫 (初入文坛)
http://cshprotocols.cshlp.org/search?fulltext=flag&submit=yes&tocsectionid=protocol&tocsectionid=recipe&tocsectionid=topic+introduction&tocsectionid=emerging+model+organisms&tocsectionid=product+protocol&tocsectionid=kit&tocsectionid=information+panel&x=0&y=0

看看这个冷泉港的protocol吧
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-27 16:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jurkat.1640 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-29 11:17 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[职场人生] 学生撞见辅导员送外卖，第二天全班都沉默了 +3 鲸鱼融金_浙江_� 2026-08-22 3/150 2026-08-26 09:01 by zzuzxg
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭