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godloveplum金虫 (小有名气)
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[求助]
PT-PCR已有3人参与
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| 我提取rna后，反转录时没有加RNA酶抑制剂和DTT，最后得到的cDNA浓度为1200多，OD值也在1.8左右，本以为这个模板是可用了，但是我在用引物PCR后，跑胶后连内参都没有条带，我一共有40个基因。第二天我又，重新选了8个基因来做，结果内参又有条带了，还是同样的模板。以前这40个基因中大多数都是P出过条带来的，但是之后就一直很难p出来了，不知道是怎么回事？老板说是我加样有问题，可是我加样已经很小心了，每次加完后都有检查，从宏观上来看，该加的都已经加了，可是为什么就一直出不来条带呢？这和加样的速度有关系吗？我加样有点慢。另外，CDNA的浓度是不是过高了呀，在网上看到有人说CDNA的浓度应该很低。可是我之前做过半定量PCR，CDNA的浓度大概在六七百左右，这样我要跑至少35个循环才有条带，在40个循环时条带才比较明显，所以这次我觉得CDNA的浓度应该比较合适，应该会有比较理想的结果，可是我pcr跑胶后，结果是很令人沮丧的，求给位专家指点呐，PCR已经困扰我好久了，我都已经研二了，时间也不多了，实验一点进展都没有，很是着急呀，请各位专家不吝赐教！非常感谢！ |
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cicelyzh
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3楼2014-01-11 19:40:05
godloveplum
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5楼2014-01-12 10:45:53