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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大质粒转化 感受态细胞问题
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研究室新生

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-01-21 15:11:30
恩啊...

谢谢大家。。已经做出来了。初步验证是正确的。。。送测序了~~~谢谢大家啦~~
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人生是一棵不停生长的树。
21楼2014-01-23 16:37:17
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般较大的质粒就不要用快速转化了，最好用经典转化。并且你可以多转一点质粒进去，然后在热激的时候延长一点时间（因为这步是增加感受态细胞通透性，使质粒易转入），同时可以加大涂板子时菌液的量。不同板子对转化也是有影响的，一般来说AMP的板子要比KANA的板子好长。如果遇到像在LK的板子里长不起来的情况，也可以尝试下调一点卡那霉素的浓度。
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没有SB的事，只有SB的人
22楼2014-01-23 19:25:41
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helongxia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 研究室新生 at 2014-01-23 16:37:17
谢谢大家。。已经做出来了。初步验证是正确的。。。送测序了~~~谢谢大家啦~~...

请问楼主最后采用什么方法做出来的？我们一直做15kb的质粒转化，但是涂板后挑菌测序都不是目的菌，感觉都没转进去，不知楼主是不是将热激时间延长了（我们一般采用42度，90s），或者其他步骤优化了。
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23楼2015-02-08 01:23:35
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光绵长

禁虫
本帖内容被屏蔽
24楼2022-03-01 17:12:04
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