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研究室新生

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-01-21 15:11:30
恩啊...

谢谢大家。。已经做出来了。初步验证是正确的。。。送测序了~~~谢谢大家啦~~
人生是一棵不停生长的树。
21楼2014-01-23 16:37:17
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般较大的质粒就不要用快速转化了,最好用经典转化。并且你可以多转一点质粒进去,然后在热激的时候延长一点时间(因为这步是增加感受态细胞通透性,使质粒易转入),同时可以加大涂板子时菌液的量。不同板子对转化也是有影响的,一般来说AMP的板子要比KANA的板子好长。如果遇到像在LK的板子里长不起来的情况,也可以尝试下调一点卡那霉素的浓度。
没有SB的事,只有SB的人
22楼2014-01-23 19:25:41
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helongxia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 研究室新生 at 2014-01-23 16:37:17
谢谢大家。。已经做出来了。初步验证是正确的。。。送测序了~~~谢谢大家啦~~...

请问楼主最后采用什么方法做出来的?我们一直做15kb的质粒转化,但是涂板后挑菌测序都不是目的菌,感觉都没转进去,不知楼主是不是将热激时间延长了(我们一般采用42度,90s),或者其他步骤优化了。
23楼2015-02-08 01:23:35
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24楼2022-03-01 17:12:04
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