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研究室新生

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 153.8
帖子: 71
在线: 16.9小时
虫号: 1494471
注册: 2011-11-16
性别: MM
专业: 抗体工程学

[求助] 大质粒转化感受态细胞问题已有7人参与

最近做一个项目，酶切连接好的质粒大小在15kb左右，自己做的DH5a感受态细胞总是转不进去，对照显示DH5a感受态细胞是没问题的，有老师说是感受态细胞的问题，需要能够吸收大质粒的感受态细胞，但不知道什么样的感受态细胞能吸收大质粒啊~~~请教各位同学老师。

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1楼2014-01-09 13:17:23

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baihaer

铜虫 (初入文坛)

应助: 11 (小学生)
金币: 241.7
红花: 1
帖子: 48
在线: 9.4小时
虫号: 1907636
注册: 2012-07-24
性别: GG
专业: 系统生物学

【答案】应助回帖

一般较大的质粒就不要用快速转化了，最好用经典转化。并且你可以多转一点质粒进去，然后在热激的时候延长一点时间（因为这步是增加感受态细胞通透性，使质粒易转入），同时可以加大涂板子时菌液的量。不同板子对转化也是有影响的，一般来说AMP的板子要比KANA的板子好长。如果遇到像在LK的板子里长不起来的情况，也可以尝试下调一点卡那霉素的浓度。

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