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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化的问题
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 10:17:33
看你用的是T1载体，估计应该是用pEASY载体，这个方法很成熟也比较容易，看看你是否忽略了以下几点：
1，你PCR时用的Taq酶能否在产物的3‘端产生polyA末端；
2，平板抗性（一般是Amp），是否过量。
3，有时候感受 ...

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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希望实验可以顺顺利利
11楼2014-01-12 08:26:46
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliyusly at 2014-01-08 13:38:04
听我这边师兄说回收的DNA放久了，3‘端的polyA末端容易丢失就不容易连接上了。可以的话最好重新回收DNA...

这个我确实没考虑到
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希望实验可以顺顺利利
12楼2014-01-14 10:49:03
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 22:40:19
但是就算连不上，载体自连，只要能够转化到感受态中，就应该长菌，你现在不是什么菌都不长吗？我觉得还是感受态或者转化的问题。...

嗯，做了4个重复，就一个上面有几个白斑
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希望实验可以顺顺利利
13楼2014-01-14 10:49:55
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯，，，，
就是构建一个简单的PCR体系，包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水，无需引物，在PCR仪里直接开72度保温10至30min，即可。...

我又学到新知识了，这样就可以加a了？
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希望实验可以顺顺利利
14楼2014-01-14 10:50:54
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯，，，，
就是构建一个简单的PCR体系，包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水，无需引物，在PCR仪里直接开72度保温10至30min，即可。...

那模板加多少啊？
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希望实验可以顺顺利利
15楼2014-01-14 11:13:15
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aoaoshch

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by jmh5d at 2014-01-14 11:13:15
那模板加多少啊？...

模版的量没有固定吧，20微体系，加10微吧，够你连T载体就行了。
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16楼2014-01-15 17:04:46
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