2楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 10:17:33
看你用的是T1载体，估计应该是用pEASY载体，这个方法很成熟也比较容易，看看你是否忽略了以下几点：
1，你PCR时用的Taq酶能否在产物的3‘端产生polyA末端；
2，平板抗性（一般是Amp），是否过量。
3，有时候感受 ...

3楼: Originally posted by shiliyusly at 2014-01-08 13:38:04
听我这边师兄说回收的DNA放久了，3‘端的polyA末端容易丢失就不容易连接上了。可以的话最好重新回收DNA...

5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 22:40:19
但是就算连不上，载体自连，只要能够转化到感受态中，就应该长菌，你现在不是什么菌都不长吗？我觉得还是感受态或者转化的问题。...

9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯，，，，
就是构建一个简单的PCR体系，包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水，无需引物，在PCR仪里直接开72度保温10至30min，即可。...

9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯，，，，
就是构建一个简单的PCR体系，包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水，无需引物，在PCR仪里直接开72度保温10至30min，即可。...

15楼: Originally posted by jmh5d at 2014-01-14 11:13:15
那模板加多少啊？...