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jmh5d

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 10:17:33
看你用的是T1载体,估计应该是用pEASY载体,这个方法很成熟也比较容易,看看你是否忽略了以下几点:
1,你PCR时用的Taq酶能否在产物的3‘端产生polyA末端;
2,平板抗性(一般是Amp),是否过量。
3,有时候感受 ...

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
希望实验可以顺顺利利
11楼2014-01-12 08:26:46
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliyusly at 2014-01-08 13:38:04
听我这边师兄说回收的DNA放久了,3‘端的polyA末端容易丢失就不容易连接上了。可以的话最好重新回收DNA...

这个我确实没考虑到
希望实验可以顺顺利利
12楼2014-01-14 10:49:03
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-01-08 22:40:19
但是就算连不上,载体自连,只要能够转化到感受态中,就应该长菌,你现在不是什么菌都不长吗?我觉得还是感受态或者转化的问题。...

嗯,做了4个重复,就一个上面有几个白斑
希望实验可以顺顺利利
13楼2014-01-14 10:49:55
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯,,,,
就是构建一个简单的PCR体系,包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水,无需引物,在PCR仪里直接开72度保温10至30min,即可。...

我又学到新知识了,这样就可以加a了?
希望实验可以顺顺利利
14楼2014-01-14 10:50:54
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jmh5d

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by aoaoshch at 2014-01-10 15:51:13
嗯,,,,
就是构建一个简单的PCR体系,包含Taq酶、Buffer、dNTPs、水,无需引物,在PCR仪里直接开72度保温10至30min,即可。...

那模板加多少啊?
希望实验可以顺顺利利
15楼2014-01-14 11:13:15
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by jmh5d at 2014-01-14 11:13:15
那模板加多少啊?...

模版的量没有固定吧,20微体系,加10微吧,够你连T载体就行了。
16楼2014-01-15 17:04:46
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