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Caco-2细胞6孔板培养脱落？ 已有3人参与
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Caco-2细胞为贴壁细胞，用细胞培养瓶培养时一切正常，当传代到6孔培养板上培养时，正常换液，从传代开始算长满这个培养孔大概4天时间，之后再培养2天就有培养孔内细胞脱落现象，时间越长越明显，期间一直在正常换培养液，前期2天一换，后期1天1换液，还是脱落明显，肉眼看到脱落之后，用显微镜观察，发现脱落的位置及其周围的细胞，都是一些细胞碎片，不是完整的细胞。这是什么原因？之前每次换液也是显微镜观察，没有任何异常。 困惑了我很久了，之前以为培养液加的少，现在每个孔加3mL 、4mL也是会出现同样脱落的情况。 烦请高人指点！！ |
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5楼2014-05-23 12:15:43
【答案】应助回帖
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我认为消化环节是Caco-2模型成功的最关键因素之一，既要充分又不能过分。在细胞融合度大于95%时进行消化，首先用PBS洗涤一下，吸干再加5mLPBS，放进培养箱孵育5min，尽量去除培养基；吸干加入胰酶消化5min以上，呈细沙状时，加入4倍以上胰酶体积的培养基，用5mL枪使劲吹打(壮男15下，弱女子吹打20下以上)，计数时观察细胞，应该都是单个散在的。如果有2个或以上细胞成团，说明吹打不够；如果细胞大小不一，可能吹打过了。 以250000个细胞/ml的密度接种transwell，隔天换液即可。 如果有成团的细胞，在transwell的局部这部分细胞挤压像上突破，最后鼓起成泡，细胞层破裂后，成了一个洞，电阻就再也上不去了。 |
6楼2014-06-05 10:25:14