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[求助]
大肠杆菌RNA提取求大虾帮忙 已有2人参与
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本人要提取大肠杆菌的RNA做荧光定量PCR，本以为大肠的很好提，没想到提了1个多月也没有好结果，求指导！！！拜谢啊 我的问题如下： 1 菌液量如何控制，有报道说要10 +7数量级的细胞，可是1od菌浓度就已经10 +8数量级了吧？难道1OD的菌液就要稀释10倍？我稀释以后菌量很少 根本提不出来，应该怎么去菌液呢？麻烦大虾指导清楚点，一般OD多少菌液取多少毫升，加多少Trizol？ 2 加Trizol要反复吹打吗？静置多久合适？ 3 加异丙醇后需要静置吗？多久合适？其实我没静置时也有提出来过，见图，只是降解严重也有DNA污染，会不会不静置沉淀不充分呢？ 4 我发现用试管的菌液提取相对容易，而我转摇瓶发酵后就很难提取出来RNA了，取样也处于生长期的菌体，这个是什么问题呢？？？ 图中是我提的试管培养12小时的菌液，没稀释，还能出现条带，发酵的菌液根本提不出来，一条带也没有，到底怎么回事呢。。。  11.21.jpg |
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