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seaka

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1984643
注册: 2012-09-08
专业: 基础兽医学

[求助] 大肠杆菌微量凝集试验的抗原制备已有1人参与

各位大侠，新年好啊~最近我想用微量凝集试验来进行大肠杆菌抗体水平检测（具体见下），在抗原制备方面才出现问题了。第一批抗原制备出来很好用的，但是已经确定是阳性的血清，换了后面做的抗原就都没办法在凝集了，全都是第一孔就沉积下来，求助啊~

1、抗原制备：用攻毒的几株大肠杆菌培养出液，3000rpm/min，15min离心，弃上清，浓缩一下，加入甲醛使其终浓度为0.5%，37℃，灭活24h，后用灭菌生理盐水反复洗涤，调成浓缩菌液(约2×10^9CFU/mL)。4 ℃保存备用。
2、微量凝集：在 “V”型微量板上进行，用生理盐水倍比稀释被检样品，并加入微量板相应的孔中 (设阳性对照)，再往每孔中加入等量抗原(0.05 ml)，置37 ℃作用4h，按50% 终点法判定结果，以(log2)表示，同时设标准阳性血清对照。

这应该是非常简单的实验了，可是抗原老是没有办法被凝集。曾经怀疑灭活用的甲醛残留会有影响，试着洗涤2次以后，还是一样的。除了求助找出问题的原因之外，我还想知道甲醛到底对抗原的影响有多大，灭活时间过长会不会也将抗原完全破坏了，使其一点效果也没有，或是残留甲醛附着在抗原上，导致被检测的抗体失活，或者影响抗原抗体的结合？
新年第一个愿望就是能把这个问题解决了，希望各位高手帮帮忙，先谢过了！

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