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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 填料微生物用试剂盒提取DNA失败
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zhanglei419

新虫 (初入文坛)

[求助] 填料微生物用试剂盒提取DNA失败 已有2人参与

求各位大神帮助，我用康为世纪细菌基因组DNA提取试剂盒提取我生物填料塔填料上的微生物，可是失败了的，跑小胶的时候一点都没有显示的，而且好几个样品都是这样的，这是为什么呢？求助呀~~~~~~
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1楼 2013-12-29 20:47:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-30 08:23:23
首先，你用的细胞数量是否合适？
此外，盒子不是万能的，有些微生物的细胞壁比较难破，用盒子裂解不理想也很正常。
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2楼2013-12-30 03:15:33
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zhanglei419

新虫 (初入文坛)
同菌属的我师兄坐过的都没问题的，应该不是细胞壁裂解的问题吧，我粗略估算了一下，我细胞数量超过了它的检测范围，但是这样会一点都提不出来么？
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3楼2013-12-30 13:27:21
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zhanglei419

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-30 03:15:33
首先，你用的细胞数量是否合适？
此外，盒子不是万能的，有些微生物的细胞壁比较难破，用盒子裂解不理想也很正常。

我有好几个样品的，有一些是超过检测范围的，但是大多是在检测范围之内的，却提不出来的，这是为什么呢？
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4楼2013-12-30 13:42:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhanglei419 at 2013-12-30 13:42:31
我有好几个样品的，有一些是超过检测范围的，但是大多是在检测范围之内的，却提不出来的，这是为什么呢？...

可能是你做的菌不好裂解。所谓kit就是公司优化的适用于多数菌种的条件，但对于不同的菌株来说，条件未必是适合的，一般要自己摸索条件来提。
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5楼2013-12-30 14:09:19
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zhanglei419

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-30 14:09:19
可能是你做的菌不好裂解。所谓kit就是公司优化的适用于多数菌种的条件，但对于不同的菌株来说，条件未必是适合的，一般要自己摸索条件来提。...

那我试试别的盒子，谢谢
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6楼2013-12-31 13:54:12
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 16:00:24
额 这样给你说吧 我以前直接在样品里面提取细菌的DNA，几乎看不到条带，不管了 直接拿去PCR，条带是有的，如果你师兄能做的话 建议楼主严格按照说明书进行，特别是细胞浓度，要把握好，弄高度太高，加的裂解液少了 会导致裂解不完全，影响收率
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生命不息奋斗不止
7楼2013-12-31 15:52:20
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zhanglei419

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-30 03:15:33
首先，你用的细胞数量是否合适？
此外，盒子不是万能的，有些微生物的细胞壁比较难破，用盒子裂解不理想也很正常。

如果破解不了的话，应该怎么办呢？
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8楼2014-02-10 11:19:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:21:52
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhanglei419 at 2014-02-10 11:19:34
如果破解不了的话，应该怎么办呢？...

改变裂解时间和条件。实在不行自己配缓冲液手动提取。
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9楼2014-02-10 13:52:11
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