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是谁再一次

金虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by lifucheng at 2014-02-10 10:03:45
那是不是梯度峰啊?...

走梯度不会有这样的峰吧。你看我的梯度,可能会出现这种峰吗?
11楼2014-02-10 12:44:31
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lifucheng

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40-50min的杂峰有点像是梯度峰 因为在10min内变化了25% 50-60min感觉是脏东西被冲出来了 因为这个时候有机相比例大 此外 楼主走等度有这些峰没有呢?
12楼2014-02-10 13:05:24
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是谁再一次

金虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by lifucheng at 2014-02-10 13:05:24
40-50min的杂峰有点像是梯度峰 因为在10min内变化了25% 50-60min感觉是脏东西被冲出来了 因为这个时候有机相比例大 此外 楼主走等度有这些峰没有呢?

走100甲醇等度的时候没有。每次进样前我都会先冲半小时的百分百的甲醇,线是平的。
13楼2014-02-10 13:12:26
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suruiqin

版主 (知名作家)


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你这个梯度设置的有问题,一般我们不会让泵跑单纯的水相的,因为水相和有机相混合时会有气泡产生,还有就是缓冲盐容易析晶,还有就是你的梯度貌似设置的有点问题,你的样品有几个移至杂质啊,怎么40-45min设置的那么频繁?
建议把初始流动相改成甲醇及15%甲醇(0.2%缓冲盐),还有如果后面的梯度看着略调一下,怀疑你的梯度峰太多会影响你的杂质检测
所有的成就都源于新的挑战
14楼2014-02-10 13:18:47
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是谁再一次

金虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by suruiqin at 2014-02-10 13:18:47
你这个梯度设置的有问题,一般我们不会让泵跑单纯的水相的,因为水相和有机相混合时会有气泡产生,还有就是缓冲盐容易析晶,还有就是你的梯度貌似设置的有点问题,你的样品有几个移至杂质啊,怎么40-45min设置的那么 ...

这个图是一开始摸条件时的结果,用的是15%甲醇-缓冲盐溶液到90%甲醇-缓冲盐溶液。当时不知道那个位置有杂峰,以为是成分峰没有分开,所以才继续调的。这个样品有什么样的峰不清楚,因为没有人做过。
用c18跑生物碱对照品,但在45分钟后总有其它峰,那些是什么峰,怎么办。
15-90.jpg

15楼2014-02-10 15:06:33
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suruiqin

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15楼: Originally posted by 是谁再一次 at 2014-02-10 15:06:33
这个图是一开始摸条件时的结果,用的是15%甲醇-缓冲盐溶液到90%甲醇-缓冲盐溶液。当时不知道那个位置有杂峰,以为是成分峰没有分开,所以才继续调的。这个样品有什么样的峰不清楚,因为没有人做过。

15-90.jpg
...

梯度峰有没有影响,应该先跑梯度看看,然后跑空白,最后跑样品,我们做实验一般每天都会先跑一针梯度,再跑空白,然后再跑其他的,单纯看样品图是无法判断的
所有的成就都源于新的挑战
16楼2014-02-10 15:16:53
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是谁再一次

金虫 (正式写手)

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16楼: Originally posted by suruiqin at 2014-02-10 15:16:53
梯度峰有没有影响,应该先跑梯度看看,然后跑空白,最后跑样品,我们做实验一般每天都会先跑一针梯度,再跑空白,然后再跑其他的,单纯看样品图是无法判断的...

就是说这些杂峰有可能是梯度峰,也有可能是柱子里或哪里的杂质峰,是吗?
17楼2014-02-10 15:18:54
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suruiqin

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17楼: Originally posted by 是谁再一次 at 2014-02-10 15:18:54
就是说这些杂峰有可能是梯度峰,也有可能是柱子里或哪里的杂质峰,是吗?...

一般柱子里的杂质不会这么多的,我怀疑是梯度峰,反正设置梯度的准则一般是能把杂质尽量在一种流动相中体现出来,再就是梯度不能影响杂质检测
所有的成就都源于新的挑战
18楼2014-02-10 15:27:56
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是谁再一次

金虫 (正式写手)

谢谢两位了,那就是梯度峰了。只是我奇怪,这梯度峰怎么能如此多而且这么像是成分的峰。
19楼2014-02-10 15:33:30
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是谁再一次

金虫 (正式写手)

还有就是一开始我是用50%甲醇等度洗脱的,如图结果,明明很快都已经出来完了,换成梯度洗脱,明明甲醇后面的浓度高了,为什么反而出来慢。
用c18跑生物碱对照品,但在45分钟后总有其它峰,那些是什么峰,怎么办。-1
50甲醇等度洗脱.jpg

20楼2014-02-10 15:49:28
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