5楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 02:11:41
顺便提一句，用质粒转化的时候质粒不要加多了0.5ul就足够了，如果你的质粒浓度低的话1ul也够了，不然满板的转化子甚至整个平板都是白的。...

6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:31:41
pET系列的表达载体不是高拷贝质粒，所以质粒浓度不高是正常的。你可以多收些菌裂解，用一个柱子吸附，应该得到浓度可以的质粒。
如果你确定重组质粒没有问题，有可能是测序的事情，一般多送几个克隆。鉴定时双酶切 ...

7楼: Originally posted by ptccc at 2013-12-26 21:49:01
我也怀疑是我的培养基抗生素失效了，今天拿板子直接放37度培养，长了菌。然后我就重新找别人要了Pet32a拿来划线挑菌了，看来是一点懒都不能偷。我今天还重新配了所有的培养基!睡一觉醒来我就不绝望了。今天我还连接 ...

10楼: Originally posted by ptccc at 2013-12-26 21:51:55
再问一句，什么是扎板保存？就是把挑完菌的平板留起来吗？...

13楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 22:02:55
原核有原核的优势。让我来说如果能做原核我也做原核。你实验效率不错啊，昨天做原核今天就连Za了啊，重组质粒构建好了吗？对了，你们酵母转化用的是什么方法转化？还有你们Zeocin抗性平板倒平板的时候需要避光吗？ ...

15楼: Originally posted by ptccc at 2013-12-27 09:26:28
之前就是有弄好真核跟原核的酶切位点，双酶切也做好了。昨天就直接连接了Za了，连没连上我就得明天才知道了。我们酵母电转的，倒平板没有避光，当时有个比较黑暗的超净工作台。浓度也是跟Amp一样的倒好了就用锡纸封 ...

16楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-27 09:37:40
怎么会低端，做原核周期非常短，而且后期验证很容易，诱导表达很快就能出酶，而酵母就不行了，整合后验证这个验证那个，诱导表达至少半个星期，中途还要一直补加甲醇，不注意就容易染菌，论工程菌，大肠杆菌当之无 ...

18楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-27 20:13:52
晕，按照LZ的说法我都该退学几十次了。。。。做实验哪有几个顺利的，要是顺利那就不是实验了，你要表达的蛋白来源是哪里，有信号肽没？有内含子吗~？先把菌株筛查一遍，构建原核重组质粒不难，~

19楼: Originally posted by ptccc at 2013-12-31 11:15:28
我已经构建真核质粒成功了。做真核好了...