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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何鉴定细菌的DNA受损状况？
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗

[求助] 如何鉴定细菌的DNA受损状况？ 已有2人参与

我做的实验是杀菌，现在想看看杀菌后大肠杆菌的DNA受损状况。
    有人说用糖琼脂凝胶电泳能够看出长链DNA变成短的链了，我不需要达到很精确的效果，这种方法可以么？基本步骤怎么做？
    然后，如果我希望研究哪些位点容易受到这种杀菌因素的攻击，是不是得测序？
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
1楼 2013-12-25 21:57:41
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
worldbetter: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢。 2013-12-26 17:04:34
有一种称为"单细胞ＤＮＡ损伤微凝胶慧星（Comet assay）检测术“的方法，应该符合你的研究目的。
该检测法又称为单细胞凝胶电泳检测术（SCGE）或微凝胶电泳检测术，是基于电场条件下，完整超螺旋DNA保持在细胞内，而变性损伤的DNA片段，可从细胞中移出的原理。凝胶电泳后，呈现分子迁移图形，形成彗星拖尾（comet tail）现象，完整DNA染色体为“头”，而松散和断裂的DNA为“尾”，以此评价DNA损伤程度。
该法是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其适用于新鲜细菌或细胞的DNA 损伤研究，包括DNA 链断裂、DNA 剪切损伤、DNA 交联等，目前已应用于细菌的环境毒理学、放射学和抗生素敏感性研究等多领域。
《药理学通报》上有一篇综述，感兴趣，可以参考一下：单细胞DNA损伤的微凝胶慧星电泳检测法-《中国药理学通报》，不过好像是九几年的一篇，而且主要针对真核细胞的。
另外，这种检测法，现在应该有专门试剂盒卖。可自行上网搜下。
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3楼2013-12-26 10:43:20
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑用酶切的方式，选择两种酶酶切后，电泳看条带是否跟之前有变化，当然测序还是效果好一些，精确一点
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前方总有更多挑战，战胜恐惧，勇往向前，加油~~~~
2楼2013-12-26 09:38:01
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青铜时代 at 2013-12-26 10:43:20
有一种称为"单细胞ＤＮＡ损伤微凝胶慧星（Comet assay）检测术“的方法，应该符合你的研究目的。
该检测法又称为单细胞凝胶电泳检测术（SCGE）或微凝胶电泳检测术，是基于电场条件下，完整超螺旋DNA保持在细胞 ...

我试试看 谢谢。
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
4楼2013-12-26 17:04:05
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