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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物中有2个起始密码子
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ljj0720

银虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 15:31:42
后一个ATG只是一个普通的甲硫氨酸，你只要确认你的基因的相对位置确实存在ATG就没有任何问题

谢谢，我的基因的相对位置确实存在ATG
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11楼2013-12-27 07:41:53
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ljj0720

银虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-26 15:40:47
有可能会影响mRNA的二级结构而影响翻译，我有过这方面的教训

恩 好的 谢谢提醒
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12楼2013-12-27 07:47:12
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-27 07:40:19
恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东...

KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：
(1)第4位的偏好碱基为G；
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T；
(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可

百度百科上查的。
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13楼2013-12-28 13:12:34
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-27 07:40:19
恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东...

KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：
(1)第4位的偏好碱基为G；
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T；
(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可

百度百科上查的。http://baike.baidu.com/view/3101120.htm?tp=3_00
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14楼2013-12-28 13:17:58
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gaoshandian1

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-12-28 20:58:00
gyesang: 回帖置顶 2013-12-28 20:58:02
楼主要小心了，看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的，你的引物就不能用。另外，这是原核表达。就别再在这里讨论KOZAK序列了

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15楼2013-12-28 14:27:27
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 20:58:11
连载体后不移码就没问题吧

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科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
16楼2013-12-28 15:31:12
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liduanzhuo at 2013-12-28 13:12:34
KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效 ...

恩 谢谢
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17楼2013-12-28 18:21:25
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by gaoshandian1 at 2013-12-28 14:27:27
楼主要小心了，看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的，你的引物就不能用。另外，这是原核表达。就别再在 ...

高手 “酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。” 这个可以解释的详细一些吗？我基础差。。。万分感谢！
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18楼2013-12-28 18:28:15
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ljj0720

银虫 (正式写手)
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16楼: Originally posted by acvhreinlg at 2013-12-28 15:31:12
连载体后不移码就没问题吧

恩  但愿是不移码
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19楼2013-12-28 18:29:26
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我的原核表达

新虫 (初入文坛)
Kozak

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20楼2017-12-06 18:57:28
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