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ljj0720

银虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 15:31:42
后一个ATG只是一个普通的甲硫氨酸,你只要确认你的基因的相对位置确实存在ATG就没有任何问题

谢谢,我的基因的相对位置确实存在ATG
11楼2013-12-27 07:41:53
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ljj0720

银虫 (正式写手)

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8楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-26 15:40:47
有可能会影响mRNA的二级结构而影响翻译,我有过这方面的教训

恩 好的 谢谢提醒
12楼2013-12-27 07:47:12
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-27 07:40:19
恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东...

KOZAK是一个女科学家,她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子两端序列为:——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时,转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则,即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律,若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位,则Kozak规则可描述如下:
(1)第4位的偏好碱基为G;
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T;
(3)在-3,-6和-9位置,G是偏好碱基;
(4)除-3,-6和-9位,在整个侧翼序列区,C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果,不见得必须全部满足,一般来说,满足前两项即可

百度百科上查的。
13楼2013-12-28 13:12:34
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-27 07:40:19
恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东...

KOZAK是一个女科学家,她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子两端序列为:——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时,转录和翻译效率最高,特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列,并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则,即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律,若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位,则Kozak规则可描述如下:
(1)第4位的偏好碱基为G;
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T;
(3)在-3,-6和-9位置,G是偏好碱基;
(4)除-3,-6和-9位,在整个侧翼序列区,C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果,不见得必须全部满足,一般来说,满足前两项即可

百度百科上查的。http://baike.baidu.com/view/3101120.htm?tp=3_00
14楼2013-12-28 13:17:58
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gaoshandian1

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流! 2013-12-28 20:58:00
gyesang: 回帖置顶 2013-12-28 20:58:02
楼主要小心了,看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的,你的引物就不能用。另外,这是原核表达。就别再在这里讨论KOZAK序列了

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2013-12-28 14:27:27
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 20:58:11
连载体后不移码就没问题吧

[ 发自小木虫客户端 ]
科研是将金钱转换为知识的过程,而创新则是将知识转换为金钱的过程。
16楼2013-12-28 15:31:12
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ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by liduanzhuo at 2013-12-28 13:12:34
KOZAK是一个女科学家,她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响,并总结出在真核生物中,起始密码子两端序列为:——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时,转录和翻译效 ...

恩 谢谢
17楼2013-12-28 18:21:25
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ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by gaoshandian1 at 2013-12-28 14:27:27
楼主要小心了,看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的,你的引物就不能用。另外,这是原核表达。就别再在 ...

高手 “酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。” 这个可以解释的详细一些吗?我基础差。。。万分感谢!
18楼2013-12-28 18:28:15
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ljj0720

银虫 (正式写手)

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16楼: Originally posted by acvhreinlg at 2013-12-28 15:31:12
连载体后不移码就没问题吧

恩  但愿是不移码
19楼2013-12-28 18:29:26
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我的原核表达

新虫 (初入文坛)

20楼2017-12-06 18:57:28
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