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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物中有2个起始密码子
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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 引物中有2个起始密码子 已有4人参与

我在做原核表达，设计引物的时候，上游引物出现2个起始密码子，可以吗
S:  S:  5’ ATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’

[ Last edited by ljj0720 on 2013-12-25 at 13:29 ]
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1楼 2013-12-25 13:28:51
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-27 07:40:19
恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东...

KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C/N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。

所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：
(1)第4位的偏好碱基为G；
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T；
(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可

百度百科上查的。
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13楼2013-12-28 13:12:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:54:16
ljj0720: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-27 07:37:55
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。
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2楼2013-12-25 15:24:33
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

S:  5’ CCGGAATTCATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’
下划线的是酶切位点
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3楼2013-12-25 18:38:08
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

您帮我i再看看吧 谢谢
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4楼2013-12-25 18:39:34
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