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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物中有2个起始密码子
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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 引物中有2个起始密码子已有4人参与

我在做原核表达，设计引物的时候，上游引物出现2个起始密码子，可以吗
S:  S:  5’ ATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’

[ Last edited by ljj0720 on 2013-12-25 at 13:29 ]
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1楼2013-12-25 13:28:51
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gaoshandian1

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-12-28 20:58:00
gyesang: 回帖置顶 2013-12-28 20:58:02
楼主要小心了，看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的，你的引物就不能用。另外，这是原核表达。就别再在这里讨论KOZAK序列了

[ 发自小木虫客户端 ]
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15楼2013-12-28 14:27:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

您帮我i再看看吧 谢谢
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4楼2013-12-25 18:39:34
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:54:16
ljj0720: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-27 07:37:55
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。
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2楼2013-12-25 15:24:33
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

S:  5’ CCGGAATTCATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’
下划线的是酶切位点
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3楼2013-12-25 18:38:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-25 18:38:08
S:  5’ CCGGAATTCATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’
下划线的是酶切位点...

我觉得没什么问题，前面多了两个氨基酸残基，对表达产物没太多影响。
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5楼2013-12-26 03:23:31
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liduanzhuo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:42:55
ljj0720: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-27 07:38:19
ljj0720: 金币+3 2013-12-27 07:39:46
翻译起始的时候，核糖体识别的是kozak序列后面的第一个ATG，也就是前面的那个ATG，这个没有问题的。
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6楼2013-12-26 14:46:05
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:43:04
后一个ATG只是一个普通的甲硫氨酸，你只要确认你的基因的相对位置确实存在ATG就没有任何问题
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大家相互帮助哈
7楼2013-12-26 15:31:42
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bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2013-12-26 15:40:47
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:23:31
我觉得没什么问题，前面多了两个氨基酸残基，对表达产物没太多影响。...

恩  好的 谢谢
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9楼2013-12-27 07:38:09
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liduanzhuo at 2013-12-26 14:46:05
翻译起始的时候，核糖体识别的是kozak序列后面的第一个ATG，也就是前面的那个ATG，这个没有问题的。

恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东
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10楼2013-12-27 07:40:19
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