应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物中有2个起始密码子
201/2返回列表12下一页
查看: 2948  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 引物中有2个起始密码子 已有4人参与

我在做原核表达，设计引物的时候，上游引物出现2个起始密码子，可以吗
S:  S:  5’ ATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’

[ Last edited by ljj0720 on 2013-12-25 at 13:29 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-25 13:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gaoshandian1

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-12-28 20:58:00
gyesang: 回帖置顶 2013-12-28 20:58:02
楼主要小心了，看你的引物上游用了ECORI酶切位点。酶切位点不是直接加上就行的。还要看载体的这个酶切位点是怎么编码氨基酸的。比方说载体上是AGA  ATT CAA 这样的，你的引物就不能用。另外，这是原核表达。就别再在这里讨论KOZAK序列了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2013-12-28 14:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

您帮我i再看看吧 谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-25 18:39:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-25 20:54:16
ljj0720: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-27 07:37:55
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-25 15:24:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-25 15:24:33
引物里是否包括酶切位点和保护碱基？第二个ATG是目的基因的起始？如果你最终克隆到载体里的序列有两个相近的ATG，会造成不同的起始，不过你的两个ATG是in frame的，应该没有问题。

S:  5’ CCGGAATTCATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’
下划线的是酶切位点
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-25 18:38:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-12-25 18:38:08
S:  5’ CCGGAATTCATGCTCAATTTTATGACAAAG  3’
下划线的是酶切位点...

我觉得没什么问题，前面多了两个氨基酸残基，对表达产物没太多影响。
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-26 03:23:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liduanzhuo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:42:55
ljj0720: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-27 07:38:19
ljj0720: 金币+3 2013-12-27 07:39:46
翻译起始的时候，核糖体识别的是kozak序列后面的第一个ATG，也就是前面的那个ATG，这个没有问题的。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-26 14:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:43:04
后一个ATG只是一个普通的甲硫氨酸，你只要确认你的基因的相对位置确实存在ATG就没有任何问题
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
7楼2013-12-26 15:31:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2013-12-26 15:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 03:23:31
我觉得没什么问题，前面多了两个氨基酸残基，对表达产物没太多影响。...

恩  好的 谢谢
回复此楼
9楼2013-12-27 07:38:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liduanzhuo at 2013-12-26 14:46:05
翻译起始的时候，核糖体识别的是kozak序列后面的第一个ATG，也就是前面的那个ATG，这个没有问题的。

恩 谢谢 想问一下  kozak序列是什么东东
赞一下 回复此楼
10楼2013-12-27 07:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljj0720 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭