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刘仁坤2013

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[求助] 细菌耐药质粒的PFGE

最近本人正在做耐药细菌质粒的PFGE，拿到了三株大肠杆菌(含有已知大小的质粒），打算让他们做MARKER，依次为R1，R27，V517。打算先跑这三株标准菌株看看情况在跑样品菌株，但总是出现问题，电泳图如下，望大家多帮忙。实验条件是酶切体系100ul,S1核酸酶20U，酶切20分钟，细菌是大肠杆菌R1，R27，V517。PFGE条件是6V/CM,起始秒1S，结束秒25S，总时间是24小时。
首先我想问一个问题：不同的细菌可以用S1核酸酶切吗？条件都相同吗？

2013-12-24,R1,R27,V517-2.jpg

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如何在含有耐药性的细菌中进行质粒转导已经有4人回复

1楼 2013-12-25 09:33:49

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刘仁坤2013

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还有一个问题，电泳条带是拖尾现象，是由于酶切切过了呢，还是切的不够啊？自己顶一下。

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2楼2013-12-25 09:40:36

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刘仁坤2013

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电泳条件： 6V/CM,起始秒1S，结束秒25S，总时间是13小时。
MARKER为低范围PFG Marker(192KB-2.03KB)
琼脂糖凝胶是Pulsed Field Certified Agarose
标本为大肠杆菌V517
1-7泳道，酶量20U,酶切时间依次为5,10,20,30,40,50,60（分钟）
8-14泳道，酶切时间为30分钟，酶量依次为5,10,15,20,25,30,35U。
电泳图如下

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3楼2014-01-06 17:14:46

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