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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 求助：色谱条件相同，隔段时间后进样，出峰情况为什么变化？
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王文静341

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：色谱条件相同，隔段时间后进样，出峰情况为什么变化？已有4人参与

最近在做HPLC的成分含量测定，同时测两种成分，经过筛选各种流动相系统，暂定乙腈-0.033磷酸盐（磷酸调pH3），隔一周后相同条件（色谱柱，流动相系统条件，色谱仪，样品等），重复进样后，两成分峰拖尾因子由原来的1.5增到2多，请问为什么呢？好不容易确定的方法呢，唉唉
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潜心学习
1楼2013-12-20 15:06:02
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顾莫柔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王文静341: 金币+2 2013-12-20 16:46:15
建议：1.在流动相中加三乙胺；2.降低进样量或进样浓度；3.消除柱外死体积效应；4.100%异丙醇低流速冲洗柱子。
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矫情的不是我是生活，残忍的不是我是很多。
2楼2013-12-20 15:34:27
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ayata

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个柱子是不是用过以后变化了，室温是不是不一样
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3楼2013-12-20 15:37:48
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yi_wang

铁杆木虫 (著名写手)

roye

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是可以考虑柱温的问题，柱温不同有可能影响拖尾因子和分离情况。
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哥泡的不是论坛,是寂寞....
4楼2013-12-20 16:42:15
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王文静341

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ayata at 2013-12-20 15:37:48
这个柱子是不是用过以后变化了，室温是不是不一样

中间用过别的流动相，是不是柱子没冲干净？可是我甲醇10-50-100各1h冲了呢
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潜心学习
5楼2013-12-20 16:44:47
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王文静341

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 顾莫柔 at 2013-12-20 15:34:27
建议：1.在流动相中加三乙胺；2.降低进样量或进样浓度；3.消除柱外死体积效应；4.100%异丙醇低流速冲洗柱子。

中间用过别的流动相进过样，还想请教为什么？
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潜心学习
6楼2013-12-20 16:46:08
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王文静341

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yi_wang at 2013-12-20 16:42:15
是不是可以考虑柱温的问题，柱温不同有可能影响拖尾因子和分离情况。

柱温一直保持没变化的呢
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潜心学习
7楼2013-12-20 16:46:52
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顾莫柔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 王文静341 at 2013-12-20 16:46:08
中间用过别的流动相进过样，还想请教为什么？...

走过别的样，可推断柱污染。需用100%异丙醇冲洗。10%或20%甲醇、乙腈水是洗脱不下来的。
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矫情的不是我是生活，残忍的不是我是很多。
8楼2013-12-20 16:49:10
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王文静341

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 顾莫柔 at 2013-12-20 16:49:10
走过别的样，可推断柱污染。需用100%异丙醇冲洗。10%或20%甲醇、乙腈水是洗脱不下来的。...

没有进别的样品，只是试用了别的流动相系统，酸或碱性的流动相
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潜心学习
9楼2013-12-21 16:35:33
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pipwang

金虫 (正式写手)
建议每次做完样品，先用10%甲醇水冲洗然后再用甲醇冲洗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-12-23 22:20:31
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