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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白质电泳
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shuoquan360

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助：蛋白质电泳

大家好
我做SDS-PAGE出现这样的情况：
A 、B为分子量在60000-70000的蛋白
Marker 为低分子量蛋白 （14000-96000）
不连续系统：分离胶10%，层积胶5%，TRIS-HCL缓冲体系
样品缓冲液配方为：（SDS+TRIS-HCL+巯基乙醇+溴芬兰+双蒸水）参考的是郭晓君的蛋白质电泳实验技术一书。

层记胶100V，分离胶180V银染，
样品处理和MARKER处理一样，加样品缓冲液，100度5分钟
结果A、B两个样品都跑出来结果了
而MARKERS什么都没有！
连一个点也没有，不知道什么原因！
希望大家帮我检查一下！谢谢

[ Last edited by telomerase on 2008-1-1 at 21:52 ]
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1楼 2008-01-01 09:22:40
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linlinsun

铁虫 (小有名气)
你的操作有可能使Marker变成了沉淀，上样时只留在点样空，
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珍惜！诚实！勤奋！智慧！
9楼2008-01-04 16:23:37
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★ ★
asr(金币+1,VIP+0):thanks.辛苦了,新年快乐!
johnsooh(金币+1,VIP+0):^_^
是不是没加进去样哦 有可能降解 不过不太可能一点都没有
建议重新跑一块胶
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活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-01-01 10:44:24
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huang1962

银虫 (小有名气)
这种情行，再做一次就对了。可能你的maker已经不能用了，拿错了 …
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3楼2008-01-01 15:21:27
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shuoquan360

铁虫 (小有名气)
正在重新做
刚买的MARKER，应该没问题 ，我加了4个 MARKER的样，也排除了没加上的可能，
按说明说上的，MARKERS先用上样液定溶200ul，100度5分钟，然后取10ul，稀释50倍，我又煮了一次，估计问题在这里，最后进行银染。是不是只煮一次，以后就不用煮了，刚开始做，不太懂啊
赞一下 回复此楼
4楼2008-01-01 15:31:59
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