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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白质电泳
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shuoquan360

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助：蛋白质电泳

大家好
我做SDS-PAGE出现这样的情况：
A 、B为分子量在60000-70000的蛋白
Marker 为低分子量蛋白 （14000-96000）
不连续系统：分离胶10%，层积胶5%，TRIS-HCL缓冲体系
样品缓冲液配方为：（SDS+TRIS-HCL+巯基乙醇+溴芬兰+双蒸水）参考的是郭晓君的蛋白质电泳实验技术一书。

层记胶100V，分离胶180V银染，
样品处理和MARKER处理一样，加样品缓冲液，100度5分钟
结果A、B两个样品都跑出来结果了
而MARKERS什么都没有！
连一个点也没有，不知道什么原因！
希望大家帮我检查一下！谢谢

[ Last edited by telomerase on 2008-1-1 at 21:52 ]
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1楼 2008-01-01 09:22:40
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★ ★
asr(金币+1,VIP+0):thanks.辛苦了,新年快乐!
johnsooh(金币+1,VIP+0):^_^
是不是没加进去样哦 有可能降解 不过不太可能一点都没有
建议重新跑一块胶
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活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-01-01 10:44:24
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huang1962

银虫 (小有名气)
这种情行，再做一次就对了。可能你的maker已经不能用了，拿错了 …
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3楼2008-01-01 15:21:27
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shuoquan360

铁虫 (小有名气)
正在重新做
刚买的MARKER，应该没问题 ，我加了4个 MARKER的样，也排除了没加上的可能，
按说明说上的，MARKERS先用上样液定溶200ul，100度5分钟，然后取10ul，稀释50倍，我又煮了一次，估计问题在这里，最后进行银染。是不是只煮一次，以后就不用煮了，刚开始做，不太懂啊
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4楼2008-01-01 15:31:59
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connexin

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):^_^ 普通Marker买回来通常需要加热变性及稀释处理。处理完后不需第二次加热变性，电泳时直接点样即可。
建议你买一支预染MARKER，又好用又省事。
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5楼2008-01-01 16:20:35
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reasonspare

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by shuoquan360 at 2008-1-1 15:31:
正在重新做
刚买的MARKER，应该没问题 ，我加了4个 MARKER的样，也排除了没加上的可能，
按说明说上的，MARKERS先用上样液定溶200ul，100度5分钟，然后取10ul，稀释50倍，我又煮了一次，估计问题在这里，最后进 ...

兄弟,楼上的说得没有错,你的样品没有加上去,你的Marker变性前最好加入等体积的2 *buffer, 这样就没有问题了。
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
6楼2008-01-01 16:33:11
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garon006

银虫 (正式写手)
用预染marker吧，国产的marker质量不是太好，有问题的。
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7楼2008-01-02 14:11:07
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乐俊

新虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):哈哈,欢迎常来,.
应该是marker的问题
我曾经样品煮过多次都跑出条带来了
marker中是否要加loading buffer要根据其说明书中写的来操作
现在很多marker都可以直接上样
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8楼2008-01-03 21:36:08
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linlinsun

铁虫 (小有名气)
你的操作有可能使Marker变成了沉淀，上样时只留在点样空，
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珍惜！诚实！勤奋！智慧！
9楼2008-01-04 16:23:37
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hn_zht

铁虫 (著名写手)
你的MAKER热处理了吗?一定要变性热处理
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欢迎加入糖生物技术群：177364074
10楼2008-01-04 16:26:23
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