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shuoquan360

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助:蛋白质电泳

大家好
我做SDS-PAGE出现这样的情况:
A 、B为分子量在60000-70000的蛋白
Marker 为低分子量蛋白 (14000-96000)
不连续系统:分离胶10%,层积胶5%,TRIS-HCL缓冲体系
样品缓冲液配方为:(SDS+TRIS-HCL+巯基乙醇+溴芬兰+双蒸水)参考的是郭晓君的蛋白质电泳实验技术一书。

层记胶100V,分离胶180V银染,
样品处理和MARKER处理一样,加样品缓冲液,100度5分钟
结果A、B两个样品都跑出来结果了
而MARKERS什么都没有!
连一个点也没有,不知道什么原因!
希望大家帮我检查一下!谢谢

[ Last edited by telomerase on 2008-1-1 at 21:52 ]
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

不同的MAKER用法不一,仔细阅读。
13楼2008-01-07 13:57:21
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

★ ★
asr(金币+1,VIP+0):thanks.辛苦了,新年快乐!
johnsooh(金币+1,VIP+0):^_^
是不是没加进去样哦 有可能降解 不过不太可能一点都没有
建议重新跑一块胶
活着就要让人感受到你的存在。
2楼2008-01-01 10:44:24
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huang1962

银虫 (小有名气)

这种情行,再做一次就对了。可能你的maker已经不能用了,拿错了 …
3楼2008-01-01 15:21:27
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shuoquan360

铁虫 (小有名气)

正在重新做
刚买的MARKER,应该没问题 ,我加了4个 MARKER的样,也排除了没加上的可能,
按说明说上的,MARKERS先用上样液定溶200ul,100度5分钟,然后取10ul,稀释50倍,我又煮了一次,估计问题在这里,最后进行银染。是不是只煮一次,以后就不用煮了,刚开始做,不太懂啊
4楼2008-01-01 15:31:59
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