12楼: Originally posted by dongge2013 at 2013-12-16 15:36:01
找下游引物干什么啊，有什么意义

11楼: Originally posted by 好好后生 at 2013-12-16 13:48:22
测序的时候没说明的话，一般都是只做上游引物测序的，末尾的都是不可信的，想要完整的要上下游都测，再互补了才行，你的同源性只有36%的话，明显不是你要的目的基因了，重新设计引物吧

10楼: Originally posted by lm2570 at 2013-12-15 13:42:46
你把下游引物反向互补后，再在所测序列中找一下，应该有了，如果没有，那你的序列可能沒测通

9楼: Originally posted by 半生一梦 at 2013-12-15 13:38:35
下游引物要反向互补一下才能找得到的吧。。。。
感觉cDNA做普通PCR的话貌似可以放很久呢
要不连载体转化下感受态再去测序试试哎 那个还是很准的

13楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2013-12-17 18:26:37
不一定非得要下游引物，只要同源率高也可以，我们实验室师姐跑出来的基本上都能找得到，我同源率低，可能是模板之类的出问题了，还在查找...

16楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2013-12-17 18:30:39
反补了的，还是找不到，而且在ncbi上和26s同源率竟然达到98%最高，应该不是我要的了，出现了非特异性扩增，我也不晓得为啥子...