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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样的跑胶结果让我很崩溃
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wangbo2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的胶没倒好，MARK都没跑好，还有就是上样量大了，调整减小上样量
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11楼2013-12-14 08:57:14
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dororo150 at 2013-12-14 01:13:24
你这明显感觉没跑开啊    你才跑了多久电泳就停了   多跑会儿   mark最快的快要跑到头了再停电泳仪

可是跑的时间短也应该会有目的条带吧，怎么这一点也没有啊
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12楼2013-12-14 10:11:36
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiaqing2 at 2013-12-14 06:32:20
要不是引物特异性不好，要不是模板加多了，建议把模板稀释10倍或者100倍再试试

100微升加了2微升的模板，不算多吧
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13楼2013-12-14 10:12:13
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mouhaobin

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by KEVIN_LOVE at 2013-12-13 21:57:16
我用的是1的胶，100毫升加1克琼脂糖，微波炉里加热5分子，然后加10微升Dured，再加热2分钟，倒胶，凝固20多分钟，之后跑胶。每次我摸着都凝固了啊...

煮沸了有没有摇匀？胶不均匀，对电泳的影响很大的。煮沸了要拿出来摇几下，这样反复3次。用DuRed是没有问题的，所以你这个现象可以排除核酸染料的问题。还有跑胶的电压也很重要的
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14楼2013-12-14 13:27:20
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qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
14楼: Originally posted by mouhaobin at 2013-12-14 13:27:20
煮沸了有没有摇匀？胶不均匀，对电泳的影响很大的。煮沸了要拿出来摇几下，这样反复3次。用DuRed是没有问题的，所以你这个现象可以排除核酸染料的问题。还有跑胶的电压也很重要的...

同意，琼脂糖胶的凝结肯定没有问题，关键是你是不是完全融开。每次融胶的时候分几次加热至沸腾，直到没有明显的颗粒物为止。染料在融开之后加，摸着不烫手的时候加进去就行，摇匀再到。凝胶不能着急，完全凝结再上样电泳。
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15楼2013-12-14 13:44:51
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，你的pcr结果就不positive，confirm一下自己的浓度，其次marker跑不好是因为你的gel配置有问题，你先确认下你的浓度和溶胶之后加染料时间
good luck
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修身、齐家、治国、平天下
16楼2013-12-14 20:53:40
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by alicelchf at 2013-12-14 20:53:40
首先，你的pcr结果就不positive，confirm一下自己的浓度，其次marker跑不好是因为你的gel配置有问题，你先确认下你的浓度和溶胶之后加染料时间
good luck

1%的浓度，我是先溶5分钟后就加入染料，然后再溶大约两分钟
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17楼2013-12-14 22:22:53
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Dr.G

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
KEVIN_LOVE: 金币+1, ★有帮助 2013-12-15 23:45:14
1.Marker 用的是100bp Ladder的话，建议胶浓度用2%，否则跑不开；
2.增加退火温度或减少循环数，可以减少非特异性扩增；
3.模板浓度可能太高，如楼上，增加稀释倍数试一试；
4.降低延伸时间，也可以减少非特异性扩增（看看你使用的聚合酶的说明书，不同牌子的酶对退火温度、延伸时间等要求不同）
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18楼2013-12-15 21:33:02
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wqqqd2008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计是核酸染料的问题，你可以换一下染料试试，比如说EB
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19楼2013-12-15 21:58:11
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
一看你的孔就是没有完全凝固就拔梳子，你可以放4摄氏度冰箱里效果非常好，五六分钟就行，自己感觉下，再一个上样量多少也很重要，我跑电泳上3ul和5ul就会差距很大，5ul拖尾比较严重，你可以弄一块胶，上样量递减一下看看哪个效果好
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20楼2013-12-16 09:34:59
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