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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

[求助] 这样的跑胶结果让我很崩溃 已有11人参与

我是名实验新手,最近扩基因,为什么老是出现这种情况??好几次我都快崩溃了。退火温度58-61度,(这次maker没跑开,跑开了也是这样的结果)。前几次还会出现各种各样的意想不到的结果,有时有目的条带,但是前后都会有很长的“尾巴”,真心不知道怎么回事了。我都快崩溃了,各位神,指导一下吧。感激不尽。
这样的跑胶结果让我很崩溃
IMG_20131212_204454.jpg
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Dr.G

新虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
KEVIN_LOVE: 金币+1, 有帮助 2013-12-15 23:45:14
1.Marker 用的是100bp Ladder的话,建议胶浓度用2%,否则跑不开;
2.增加退火温度或减少循环数,可以减少非特异性扩增;
3.模板浓度可能太高,如楼上,增加稀释倍数试一试;
4.降低延伸时间,也可以减少非特异性扩增(看看你使用的聚合酶的说明书,不同牌子的酶对退火温度、延伸时间等要求不同)
18楼2013-12-15 21:33:02
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-13 15:26:24
根据我的经验,很有可能是引物特异性的问题,或者聚合酶太差了。
2楼2013-12-12 23:30:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-13 15:26:31
模板是什么,PCR前是否定量或者跑胶检测?
3楼2013-12-13 00:28:23
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把你pcr的体系说一下,看看是不是模版加多了等问题……
我不会!
4楼2013-12-13 08:38:19
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