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cxlxmc

铁虫 (初入文坛)

[求助] 免疫组化 已有1人参与

有人做过大鼠肾脏VDR的免疫组化和大鼠肝脏IL-3的免疫组化吗，都是石蜡切片的，有没有具体的操作方法，需要注意哪些方面，第一次做，不太了解。谢谢！
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1楼 2013-12-12 17:02:18
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cxlxmc

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-12-29 15:35:34
一般来讲，如果是石蜡切片，
1.在二甲苯和梯度酒精溶液里脱蜡复水
2、PBS洗涤
3、用pH6.0的柠檬酸盐缓冲液95℃水浴15分钟，静置冷却至室温。
4、PBS洗涤，滴加过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟。PBS洗涤3次
5 ...

1.DAB的显色时间是多少呢，如何控制
2.PBS和枸橼酸的配方是多少呢，pH如何调呢
，谢谢了
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3楼2014-01-02 15:45:02
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秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-12-29 16:11:05
一般来讲，如果是石蜡切片，
1.在二甲苯和梯度酒精溶液里脱蜡复水
2、PBS洗涤
3、用pH6.0的柠檬酸盐缓冲液95℃水浴15分钟，静置冷却至室温。
4、PBS洗涤，滴加过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟。PBS洗涤3次
5、除去PBS液，滴加封闭血清，室温孵育10分钟
6、除去血清，滴加一抗，4摄氏度过夜
7、PBS洗涤，滴加生物素标记的二抗，室温孵育30分钟。PBS洗涤
8、除去PBS液，滴加链霉素抗生物素过氧化物酶作用液，室温孵育10分钟，PBS洗涤
9、除去PBS，滴加DAB显色，蒸馏水终止
10、自来水冲洗，复染或不复染，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片
这是我们实验室免疫组化的步骤，二抗的选择看你用什么样的显色液，若是做荧光，封片用抗淬灭的封片剂，推荐daco，一抗孵育完后要充分洗涤。还有，一抗的适用浓度要摸索
赞一下(1人) 回复此楼
认真过好每一天！
2楼2013-12-29 15:35:34
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