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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母双杂交 互换载体后结果不一致
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phralyhuing

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母双杂交 互换载体后结果不一致

最近在做酵母双杂交试验研究蛋白之间的相互作用，用的载体是Y187和2HGOLD,构建好载体后，酵母转化子表现都正常，也没有毒性及自激活现象。最后融合到四缺上后，连接pGADT7的一个蛋白和连接pGBKT7的另外一个蛋白表现有相互作用，但是互换载体后，却没有长出菌斑来，这是怎么回事啊，我已经重复四次了，都是这样的结果。跪求高手给解答啊！！
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1楼 2013-12-06 16:52:40
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-07 14:10:44
不奇怪，本身就是融合蛋白， 谁也不清楚结构什么的会受到影响。
毕竟单单用Y2H的方法证明蛋白互做是不充分的， 楼主可以试试其他的试验方法，比如GST pull-down之类的。
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2楼2013-12-06 18:01:54
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phralyhuing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-12-06 18:01:54
不奇怪，本身就是融合蛋白， 谁也不清楚结构什么的会受到影响。
毕竟单单用Y2H的方法证明蛋白互做是不充分的， 楼主可以试试其他的试验方法，比如GST pull-down之类的。

谢谢您的解答！
现在已经确定这两个蛋白之间存在相互作用，只是用酵母双杂再验证一下。
而互换载体后结果不一致这个现象，我查文献也没有看到这种情况的说明。有师兄说只做单面就可以了，但是单面有足够的说服力吗？
没法分析现在的情况，都没法继续做下面的实验了。
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3楼2013-12-07 10:14:13
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