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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
土壤DNA吗?那你就3微升模板,各1微升的上下游引物,让Thermo的产品K1081的MIX 25微升,再加20微升水,你试试绝对很好。
挥霍不起青春
21楼2013-12-05 22:30:56
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wairi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得PCR条件的问题应该不大,主要可能是腐殖酸影响了你的后续实验,给你如下几个建议:1.对样品进行前处理,去除腐殖酸,一般常用磷酸盐溶液洗涤法。2.在PCR体系中加入如BSA、甜菜碱等酶保护剂。3.多回收PCR产物,集中纯化。纯化的手段可以采用低熔点琼脂糖,过柱子等等。
22楼2013-12-06 16:20:54
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heijiwang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

问题出在引物上,引物再换一下,我用的314f和518r,最好2μL引物,59°退火,35个循环,祝你成功!
23楼2013-12-06 17:20:20
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最好是把PCR的图附上   这么干说不好分析
兴趣是第一导师,我爱它,因此我毫无疲倦的探索
24楼2013-12-06 19:53:53
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二and亮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by weishunshun at 2013-12-05 10:38:15
进口的啊~~~...

我记得我当时用的是一个专门给提取土壤dna的试剂盒
25楼2013-12-10 09:07:22
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)

我想请问楼主,你是根据什么来判断腐殖酸浓度的?
26楼2014-12-24 22:19:26
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提取DNA的前处理采用缓冲液处理离心之后再开始提DNA的操作,合适的PH提取的效果会好很多,目前一直在研究提取DNA的方法
ControlMyself
27楼2014-12-24 23:39:57
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