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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大神们~~~求PCR指导
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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
土壤DNA吗？那你就3微升模板，各1微升的上下游引物，让Thermo的产品K1081的MIX 25微升，再加20微升水，你试试绝对很好。
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挥霍不起青春
21楼2013-12-05 22:30:56
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wairi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得PCR条件的问题应该不大，主要可能是腐殖酸影响了你的后续实验，给你如下几个建议：1.对样品进行前处理，去除腐殖酸，一般常用磷酸盐溶液洗涤法。2.在PCR体系中加入如BSA、甜菜碱等酶保护剂。3.多回收PCR产物，集中纯化。纯化的手段可以采用低熔点琼脂糖，过柱子等等。
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22楼2013-12-06 16:20:54
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heijiwang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

问题出在引物上，引物再换一下，我用的314f和518r,最好2μL引物，59°退火，35个循环，祝你成功！
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23楼2013-12-06 17:20:20
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hkqgeoffrey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最好是把PCR的图附上   这么干说不好分析
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兴趣是第一导师，我爱它，因此我毫无疲倦的探索
24楼2013-12-06 19:53:53
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二and亮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by weishunshun at 2013-12-05 10:38:15
进口的啊~~~...

我记得我当时用的是一个专门给提取土壤dna的试剂盒
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25楼2013-12-10 09:07:22
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)
我想请问楼主，你是根据什么来判断腐殖酸浓度的？
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26楼2014-12-24 22:19:26
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提取DNA的前处理采用缓冲液处理离心之后再开始提DNA的操作，合适的PH提取的效果会好很多，目前一直在研究提取DNA的方法
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ControlMyself
27楼2014-12-24 23:39:57
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