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解茵莺

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好
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11楼2013-12-04 20:03:08
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07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你在论坛里搜搜，我记得以前也有人问过这样的问题。
原因可能是：土壤DNA杂质太多，纯化效果不理想，测OD结果传上来看看；
PCR条件没优化好；
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12楼2013-12-05 08:56:44
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 07bio at 2013-12-05 08:56:44
你在论坛里搜搜，我记得以前也有人问过这样的问题。
原因可能是：土壤DNA杂质太多，纯化效果不理想，测OD结果传上来看看；
PCR条件没优化好；

试剂盒提的杂质腐殖酸很多~~蛋白纯度还可以~~大概1.6以上~~手提的纯度就更差了~~纯化后也不理想
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苦逼苦逼~~~
13楼2013-12-05 10:25:11
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二and亮

新虫 (小有名气)
用的什么试剂盒，进口的效果好，曾经提过。
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14楼2013-12-05 10:25:16
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 解茵莺 at 2013-12-04 20:03:08
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好

哎~~现在就是不知道原因是什么~~手提了试了但是纯化效果不理想~~也不知道是不是土壤本身有问题~~纠结苦恼
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苦逼苦逼~~~
15楼2013-12-05 10:26:22
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 解茵莺 at 2013-12-04 20:03:08
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好

哎~~~手提的方法试了但是纯化效果不好~~回收率很差~~回收之后还是有~~杂质~~现在怀疑是不是土壤本身的问题~~纠结苦恼
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苦逼苦逼~~~
16楼2013-12-05 10:28:56
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wubingqi at 2013-12-04 08:47:09
那就适当增加几个循环或是提高下模版量啊

真心也试了但是还是不行啊
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苦逼苦逼~~~
17楼2013-12-05 10:30:14
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-12-04 08:29:06
楼主有木有测过260/280nm和260nm下的吸光度？

测了啊但是腐殖酸含量较多~~蛋白还可以1.6-2之间
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苦逼苦逼~~~
18楼2013-12-05 10:32:02
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weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 二and亮 at 2013-12-05 10:25:16
用的什么试剂盒，进口的效果好，曾经提过。

进口的啊~~~
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苦逼苦逼~~~
19楼2013-12-05 10:38:15
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07bio

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by weishunshun at 2013-12-05 10:25:11
试剂盒提的杂质腐殖酸很多~~蛋白纯度还可以~~大概1.6以上~~手提的纯度就更差了~~纯化后也不理想...

那可能是酸影响了酶的活性。如能继续纯化最好，不行的话你浓度调低，考虑做梯度试试，稀释也可以用ph8.8的tris-hcl EDTA
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20楼2013-12-05 11:28:55
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