应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大神们~~~求PCR指导
272/3返回列表上一页123下一页
查看: 2656  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

解茵莺

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好
赞一下 回复此楼
11楼2013-12-04 20:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07bio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你在论坛里搜搜，我记得以前也有人问过这样的问题。
原因可能是：土壤DNA杂质太多，纯化效果不理想，测OD结果传上来看看；
PCR条件没优化好；
赞一下 回复此楼
12楼2013-12-05 08:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 07bio at 2013-12-05 08:56:44
你在论坛里搜搜，我记得以前也有人问过这样的问题。
原因可能是：土壤DNA杂质太多，纯化效果不理想，测OD结果传上来看看；
PCR条件没优化好；

试剂盒提的杂质腐殖酸很多~~蛋白纯度还可以~~大概1.6以上~~手提的纯度就更差了~~纯化后也不理想
赞一下 回复此楼
苦逼苦逼~~~
13楼2013-12-05 10:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二and亮

新虫 (小有名气)
用的什么试剂盒，进口的效果好，曾经提过。
赞一下 回复此楼
14楼2013-12-05 10:25:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 解茵莺 at 2013-12-04 20:03:08
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好

哎~~现在就是不知道原因是什么~~手提了试了但是纯化效果不理想~~也不知道是不是土壤本身有问题~~纠结苦恼
赞一下 回复此楼
苦逼苦逼~~~
15楼2013-12-05 10:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 解茵莺 at 2013-12-04 20:03:08
个人认为自己配试剂比试剂盒来得好。
杂质多可以用酚：氯仿：异戊醇多纯化一次
PCR不好的原因也很多，也有可能是干燥的时候乙醇没干燥好

哎~~~手提的方法试了但是纯化效果不好~~回收率很差~~回收之后还是有~~杂质~~现在怀疑是不是土壤本身的问题~~纠结苦恼
赞一下 回复此楼
苦逼苦逼~~~
16楼2013-12-05 10:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wubingqi at 2013-12-04 08:47:09
那就适当增加几个循环或是提高下模版量啊

真心也试了但是还是不行啊
赞一下 回复此楼
苦逼苦逼~~~
17楼2013-12-05 10:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-12-04 08:29:06
楼主有木有测过260/280nm和260nm下的吸光度？

测了啊但是腐殖酸含量较多~~蛋白还可以1.6-2之间
赞一下 回复此楼
苦逼苦逼~~~
18楼2013-12-05 10:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishunshun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 二and亮 at 2013-12-05 10:25:16
用的什么试剂盒，进口的效果好，曾经提过。

进口的啊~~~
回复此楼
苦逼苦逼~~~
19楼2013-12-05 10:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07bio

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by weishunshun at 2013-12-05 10:25:11
试剂盒提的杂质腐殖酸很多~~蛋白纯度还可以~~大概1.6以上~~手提的纯度就更差了~~纯化后也不理想...

那可能是酸影响了酶的活性。如能继续纯化最好，不行的话你浓度调低，考虑做梯度试试，稀释也可以用ph8.8的tris-hcl EDTA
赞一下 回复此楼
20楼2013-12-05 11:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weishunshun 的主题更新
272/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭