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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问有人做烟草瞬时表达吗？求解答
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lceye

金虫 (小有名气)

[求助] 请问有人做烟草瞬时表达吗？求解答

您好，小的最近在做烟草瞬时表达，6周6-8叶左右的苗子，农杆菌注射后，第二天会出现注射液片下垂、萎蔫的现象，很是影响表达效果，前提是我已经做好了保湿措施，不知道是哪里出了问题，光照还是叶片太嫩了？求大神给解答啊。小的先谢过了。。。
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自信就好!
1楼 2013-11-28 22:07:40
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lceye: 金币+5 2013-11-29 15:18:15
请问注射时脓杆菌的浓度用的是多少？
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2楼2013-11-29 00:44:19
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你农杆菌的浓度太高，测个OD值在注射之前，我一般用OD=0.1左右，但不同蛋白有不同的最佳OD值；
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射，看看是否植株还正常。如果空的农杆菌都让叶片萎焉了，那很可能是你的农杆菌浓度太高了。
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3楼2013-11-29 11:01:20
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lceye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-11-29 00:44:19
请问注射时脓杆菌的浓度用的是多少？

目前用的是0.5左右的，以前做过0.2-1.0的梯度实验，也出现过这个问题。个人感觉和烟草的状态关系较大。谢谢
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4楼2013-11-29 15:19:50
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lceye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 11:01:20
可能是你农杆菌的浓度太高，测个OD值在注射之前，我一般用OD=0.1左右，但不同蛋白有不同的最佳OD值；
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射，看看是否植株还正常。如果 ...

谢谢。我表达的就是植物蛋白，用OD0.5的菌，可能是浓度高了吧。蛋白本身就是植物膜定位蛋白，不知道会不会影响。
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5楼2013-11-29 15:25:35
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lceye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 11:01:20
可能是你农杆菌的浓度太高，测个OD值在注射之前，我一般用OD=0.1左右，但不同蛋白有不同的最佳OD值；
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射，看看是否植株还正常。如果 ...

这个是荧光显微镜的检测，表达量不是很高。
请问有人做烟草瞬时表达吗？求解答
图像_624 G1.jpg
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6楼2013-11-29 15:27:06
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sun_in_night

木虫 (小有名气)
所以说你最好做个空白注射的对照，可能是od的问题，可能是蛋白问题，也可能是你操作的问题，注射的时候损害叶片太多了。其实我感觉你图片的信号不算太弱，可以选个较亮的细胞放大看看。是细胞膜的蛋白？
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lceye
7楼2013-11-29 21:37:49
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lceye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 21:37:49
所以说你最好做个空白注射的对照，可能是od的问题，可能是蛋白问题，也可能是你操作的问题，注射的时候损害叶片太多了。其实我感觉你图片的信号不算太弱，可以选个较亮的细胞放大看看。是细胞膜的蛋白？

是的，是膜定位的蛋白。谢谢你的建议。我主要是要提取这个蛋白，所以主要是要求整体的表达量要高。
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8楼2013-11-30 21:14:24
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dawiye

铜虫 (初入文坛)
请问你做瞬时表达是用的什么载体？表达量不高可能与你选择的载体有关。
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9楼2013-12-13 22:24:54
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