24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3256  |  回复: 8

lceye

金虫 (小有名气)

[求助] 请问有人做烟草瞬时表达吗?求解答

您好,小的最近在做烟草瞬时表达,6周6-8叶左右的苗子,农杆菌注射后,第二天会出现注射液片下垂、萎蔫的现象,很是影响表达效果,前提是我已经做好了保湿措施,不知道是哪里出了问题,光照还是叶片太嫩了?求大神给解答啊。小的先谢过了。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

自信就好!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lceye: 金币+5 2013-11-29 15:18:15
请问注射时脓杆菌的浓度用的是多少?
2楼2013-11-29 00:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是你农杆菌的浓度太高,测个OD值在注射之前,我一般用OD=0.1左右,但不同蛋白有不同的最佳OD值;
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射,看看是否植株还正常。如果空的农杆菌都让叶片萎焉了,那很可能是你的农杆菌浓度太高了。
3楼2013-11-29 11:01:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lceye

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-11-29 00:44:19
请问注射时脓杆菌的浓度用的是多少?

目前用的是0.5左右的,以前做过0.2-1.0的梯度实验,也出现过这个问题。个人感觉和烟草的状态关系较大。谢谢
自信就好!
4楼2013-11-29 15:19:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lceye

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 11:01:20
可能是你农杆菌的浓度太高,测个OD值在注射之前,我一般用OD=0.1左右,但不同蛋白有不同的最佳OD值;
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射,看看是否植株还正常。如果 ...

谢谢。我表达的就是植物蛋白,用OD0.5的菌,可能是浓度高了吧。蛋白本身就是植物膜定位蛋白,不知道会不会影响。
自信就好!
5楼2013-11-29 15:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lceye

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 11:01:20
可能是你农杆菌的浓度太高,测个OD值在注射之前,我一般用OD=0.1左右,但不同蛋白有不同的最佳OD值;
再者可能是你表达的蛋白不利于植物细胞的生长。
你可以拿一个空的农杆菌做一次注射,看看是否植株还正常。如果 ...

这个是荧光显微镜的检测,表达量不是很高。
请问有人做烟草瞬时表达吗?求解答
图像_624 G1.jpg

自信就好!
6楼2013-11-29 15:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sun_in_night

木虫 (小有名气)

所以说你最好做个空白注射的对照,可能是od的问题,可能是蛋白问题,也可能是你操作的问题,注射的时候损害叶片太多了。其实我感觉你图片的信号不算太弱,可以选个较亮的细胞放大看看。是细胞膜的蛋白?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2013-11-29 21:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lceye

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by sun_in_night at 2013-11-29 21:37:49
所以说你最好做个空白注射的对照,可能是od的问题,可能是蛋白问题,也可能是你操作的问题,注射的时候损害叶片太多了。其实我感觉你图片的信号不算太弱,可以选个较亮的细胞放大看看。是细胞膜的蛋白?

是的,是膜定位的蛋白。谢谢你的建议。我主要是要提取这个蛋白,所以主要是要求整体的表达量要高。
自信就好!
8楼2013-11-30 21:14:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dawiye

铜虫 (初入文坛)

请问你做瞬时表达是用的什么载体?表达量不高可能与你选择的载体有关。
9楼2013-12-13 22:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lceye 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工300求调剂 +38 肖开文 2026-04-09 42/2100 2026-04-11 21:40 by cfdbai
[考研] 求助调剂,跨调 +10 X十甫寸Y 2026-04-11 10/500 2026-04-11 21:26 by 蓝云思雨
[考研] 280求调剂 +11 wzzz王 2026-04-09 11/550 2026-04-11 20:27 by 蓝云思雨
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线,员工过不下去啦 +3 qut2026 2026-04-09 6/300 2026-04-11 19:16 by qut2026
[考研] 305求调剂 +5 77Qi 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:45 by zhq0425
[考研] 316求调剂 +4 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 4/200 2026-04-11 11:43 by zhq0425
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +6 Ytyt11 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:52 by AA小小木虫
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +10 木子念晞 2026-04-05 10/500 2026-04-11 10:44 by zhq0425
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 电气专硕320求调剂 +4 小麻子111 2026-04-10 4/200 2026-04-11 10:16 by Delta2012
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 22408 一志愿双一流人工智能300分 四六级,数据分析国奖 +4 zzfeng123 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:02 by zzfeng123
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 071000生物学调剂 +7 拉提桃 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:55 by 52305043001
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见