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[求助]
AKTA sephacryl s200 纯化蛋白质问题求助，急！！！
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我的课题是纯化真菌细胞膜上的蛋白质，在纯化的步骤上分别是细胞破碎，提取膜蛋白，硫酸铵沉淀，苯基疏水层析和AKTA Sephacryl S200凝胶过滤层析。 最近我发现一个问题，因为我的蛋白质在经过前几步（就是在凝胶过滤之前的所有提取和层析）的处理后，上样于AKTA sephacryl s200。但是如果每次配的缓冲液的pH不同，那么凝胶过滤层析出现酶活峰的位置就不同。缓冲液是20mM的硫酸缓冲液，同时含有少量的表面活性剂（0.1% 的Triton X-100）。这个问题我真的是弄不清楚，但是pH的变化会使得部分蛋白质和sephacryl s200的填料结合了吗？所以部分蛋白质就吸附上洗不下来了吗？会是这样的情况吗？ 请大家帮忙，谢谢！！！ |
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