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fluffylee

铜虫 (小有名气)

[求助] 在做一个和official method对比的方法验证实验,关于method validation的问题

想请教各位牛牛,我目前在做一个和official method比较看我的方法是不是更省时同时也很准确的实验。其中涉及到的物质有脱镁叶绿素a (pheophytin a)和原焦脱镁叶绿酸a(pyropheophytin a)(不知道中文翻得对不对。。),是算他们的比例。
由于是方法比较的验证性实验,所以要测LOD, LOQ, method accuracy, method precision等一系列的值,但是pyropheopytin a很难制得,我做method validation的时候是不是可以只用pheophytin a 一种standard呢?是不是有个原则是只要物质结构相似就可以只用一个物质的standard validate method?

另:有人用chlorophyll a制作过pheophytin a吗?我搜了些paper,都没有说得很清楚怎么做的。希望知道的筒子可以丢个paper或者method过来~

非常感谢!
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

我之前找到一篇paper里说做pheophytin a的方法,贴上来请大家帮忙看看。黄色高亮的那部分我实在不明白到底是如何得到pheophytin a的浓度47.2mg/L的。。。
而且高亮之前那句Thereafter, acetone:water was added and the diethyl ether was evaporated under nitrogen是指之前在chl a stock solution里一起带过来的acetone:water么?之后和diethyl ether一起被蒸发么?还是要另外加acetone:water?也没说加多少啊。。是加到和stock solution一样多,也就是100mL么?
谢谢大家了>.<

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5楼2013-11-23 01:53:39
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yjlrx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
release53: 金币+1, 感谢交流 2013-11-24 17:08:19
专属性,线性,溶液稳定性肯定是不能相似物质代替,LOD,LOQ好像也不行,要算峰高的,系统精密度,方法精密度,中间精密度可以,但是要算出两种物质的相对相应因子。准确度不用做,因为对于你的方法,线性和精密度过了就可以推论出你的准确度也是过的,ICH里有这句话。
还有你说是比较性验证,是什么意思,能具体点么?大家讨论一下~~~
2楼2013-11-22 21:48:57
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yjlrx

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的意思是不是你有个更优化的方法,然后验证这个方法。
3楼2013-11-22 21:56:17
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yjlrx at 2013-11-22 21:56:17
你的意思是不是你有个更优化的方法,然后验证这个方法。

谢谢回复哈~
就是测橄榄油中的pyropheophytin a(PPP)含量,是一个比较好的看thermal degradation的指标。IOC已经有一个certified的方法,最后用HPLC-DAD检测的,但是步骤比较多,还要用到SPE。我的方法是不需要任何准备实验,直接进样的。目前还在设计实验阶段。想说取40个油样,20个PPP较低的,20个PPP较高的,然后用传统方法做一遍,再用我的新方法做一遍,看看结果是不是大概一致,然后验证一下HPLC的方法。不知道这样设计实验是不是ok~想发paper的
4楼2013-11-23 01:38:04
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