【答案】应助回帖

11楼2013-11-18 14:09:38

doglet

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10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-11-18 11:31:49
是啊，每次酶切后相同质粒条带的位置都有变化，而且变化还很大。不知道是为什么...

最好上一张图看看

12楼2013-11-18 20:36:02

tiankong很蓝

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12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

同一质粒跑的两次琼脂糖电泳，其中目的条带（4646bp）的位置不同（DM为2000的）

7ZAFHCWTKB`N`9`MK~NA1TN.jpg

UG79)7H8@H4C)5EAR3Q75[5.jpg

深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！

13楼2013-11-18 21:24:39

tiankong很蓝

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12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

而且质粒双酶切前后电泳中的位置差异很大（DM是2000的，挨着marker的是未双酶切的4646bp，上面两个是双酶切后的原理上应切下796bp）

11.13a.JPG

深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！

14楼2013-11-18 21:44:55

doglet

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tiankong很蓝: 金币+5 2013-11-19 09:05:04

看了你的图后
1第一甬道的是质粒，有3条带，大量的是超螺旋，说明质粒提的还可以，酶切后有两条带，但是小条带分子量与预期不符，看看原始质粒是否正确，换一个含有5kb-4kb的marker，用单酶切成一条带看条带大小对不对，否则光用眼睛看是不准的

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15楼2013-11-19 08:54:31

冰梓漠

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看你的质粒图，有可能你做酶切的时候，只是切开了一个位点，你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕，最不济的方法就是你回收一下做一下连接，看能否成功，有时候你提取质粒时缓冲液或水加的多少，还有你的酶切体系里面的成分，也可能会造成同一条带不平齐。。欧耶耶，我说的是不是废话。T_T,T_T

风过留痕，雁过留声。

16楼2013-11-19 09:43:45

冰梓漠

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回收测序也可以的

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17楼2013-11-19 09:46:30

tiankong很蓝

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16楼: Originally posted by 冰梓漠 at 2013-11-19 09:43:45
看你的质粒图，有可能你做酶切的时候，只是切开了一个位点，你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕，最不济的方法就是你回收一下做一下连接，看能否成功，有时候你提取质粒时缓冲液或水 ...

我用的是EcoRI和XbaI，buffer为10×M。而且，我有做连接-抹板-挑单克隆-1、提质粒-双酶切-电泳；2、菌落PCR-电泳。但都没有目的条带。我不知道原因出在哪，酶是新买的，质粒是公司合成的

深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！

18楼2013-11-19 10:32:46

zz53qq53

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胶浓度配置的不一样跑样的结果也会不一样还有跑样的时间也会影响

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19楼2013-11-27 16:11:16