24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1992  |  回复: 18

liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-11-18 11:31:49
是啊,每次酶切后相同质粒条带的位置都有变化,而且变化还很大。不知道是为什么...

提取的质粒大多以超螺旋或开环构型存在,酶切过后,质粒呈线性状态,跑胶结果相对于超螺旋或开环肯定会变化。lz有做单切和空白对照吗?这样有助于您判断跑胶位置变化的原因。
11楼2013-11-18 14:09:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doglet

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-11-18 11:31:49
是啊,每次酶切后相同质粒条带的位置都有变化,而且变化还很大。不知道是为什么...

最好上一张图看看
12楼2013-11-18 20:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

同一质粒跑的两次琼脂糖电泳,其中目的条带(4646bp)的位置不同(DM为2000的)
琼脂糖凝胶电泳怪现象
7ZAFHCWTKB`N`9`MK~NA1TN.jpg


琼脂糖凝胶电泳怪现象-1
UG79)7H8@H4C)5EAR3Q75[5.jpg

深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
13楼2013-11-18 21:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

而且质粒双酶切前后电泳中的位置差异很大(DM是2000的,挨着marker的是未双酶切的4646bp,上面两个是双酶切后的原理上应切下796bp)
琼脂糖凝胶电泳怪现象-2
11.13a.JPG

深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
14楼2013-11-18 21:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tiankong很蓝: 金币+5 2013-11-19 09:05:04
看了你的图后
1第一甬道的是质粒,有3条带,大量的是超螺旋,说明质粒提的还可以,酶切后有两条带,但是小条带分子量与预期不符,看看原始质粒是否正确,换一个含有5kb-4kb的marker,用单酶切成一条带看条带大小对不对,否则光用眼睛看是不准的
15楼2013-11-19 08:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰梓漠

新虫 (初入文坛)

看你的质粒图,有可能你做酶切的时候,只是切开了一个位点,你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕,最不济的方法就是你回收一下做一下连接,看能否成功,有时候你提取质粒时缓冲液或水加的多少,还有你的酶切体系里面的成分,也可能会造成同一条带不平齐。。欧耶耶,我说的是不是废话。T_T,T_T
风过留痕,雁过留声。
16楼2013-11-19 09:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰梓漠

新虫 (初入文坛)

回收测序也可以的
风过留痕,雁过留声。
17楼2013-11-19 09:46:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 冰梓漠 at 2013-11-19 09:43:45
看你的质粒图,有可能你做酶切的时候,只是切开了一个位点,你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕,最不济的方法就是你回收一下做一下连接,看能否成功,有时候你提取质粒时缓冲液或水 ...

我用的是EcoRI和XbaI,buffer为10×M。而且,我有做连接-抹板-挑单克隆-1、提质粒-双酶切-电泳;2、菌落PCR-电泳。但都没有目的条带。我不知道原因出在哪,酶是新买的,质粒是公司合成的
深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
18楼2013-11-19 10:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zz53qq53

银虫 (初入文坛)

胶浓度配置的不一样 跑样的结果也会不一样  还有跑样的时间也会影响
19楼2013-11-27 16:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tiankong很蓝 的主题更新
信息提示
请填处理意见