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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳怪现象
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-11-18 11:31:49
是啊，每次酶切后相同质粒条带的位置都有变化，而且变化还很大。不知道是为什么...

提取的质粒大多以超螺旋或开环构型存在，酶切过后，质粒呈线性状态，跑胶结果相对于超螺旋或开环肯定会变化。lz有做单切和空白对照吗？这样有助于您判断跑胶位置变化的原因。
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11楼2013-11-18 14:09:38
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doglet

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-11-18 11:31:49
是啊，每次酶切后相同质粒条带的位置都有变化，而且变化还很大。不知道是为什么...

最好上一张图看看
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12楼2013-11-18 20:36:02
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

同一质粒跑的两次琼脂糖电泳，其中目的条带（4646bp）的位置不同（DM为2000的）
琼脂糖凝胶电泳怪现象
7ZAFHCWTKB`N`9`MK~NA1TN.jpg


琼脂糖凝胶电泳怪现象-1
UG79)7H8@H4C)5EAR3Q75[5.jpg
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
13楼2013-11-18 21:24:39
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by doglet at 2013-11-18 20:36:02
最好上一张图看看...

而且质粒双酶切前后电泳中的位置差异很大（DM是2000的，挨着marker的是未双酶切的4646bp，上面两个是双酶切后的原理上应切下796bp）
琼脂糖凝胶电泳怪现象-2
11.13a.JPG
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
14楼2013-11-18 21:44:55
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tiankong很蓝: 金币+5 2013-11-19 09:05:04
看了你的图后
1第一甬道的是质粒，有3条带，大量的是超螺旋，说明质粒提的还可以，酶切后有两条带，但是小条带分子量与预期不符，看看原始质粒是否正确，换一个含有5kb-4kb的marker，用单酶切成一条带看条带大小对不对，否则光用眼睛看是不准的
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15楼2013-11-19 08:54:31
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冰梓漠

新虫 (初入文坛)
看你的质粒图，有可能你做酶切的时候，只是切开了一个位点，你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕，最不济的方法就是你回收一下做一下连接，看能否成功，有时候你提取质粒时缓冲液或水加的多少，还有你的酶切体系里面的成分，也可能会造成同一条带不平齐。。欧耶耶，我说的是不是废话。T_T,T_T
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风过留痕，雁过留声。
16楼2013-11-19 09:43:45
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冰梓漠

新虫 (初入文坛)
回收测序也可以的
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风过留痕，雁过留声。
17楼2013-11-19 09:46:30
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 冰梓漠 at 2013-11-19 09:43:45
看你的质粒图，有可能你做酶切的时候，只是切开了一个位点，你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕，最不济的方法就是你回收一下做一下连接，看能否成功，有时候你提取质粒时缓冲液或水 ...

我用的是EcoRI和XbaI，buffer为10×M。而且，我有做连接-抹板-挑单克隆-1、提质粒-双酶切-电泳；2、菌落PCR-电泳。但都没有目的条带。我不知道原因出在哪，酶是新买的，质粒是公司合成的
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
18楼2013-11-19 10:32:46
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zz53qq53

银虫 (初入文坛)
胶浓度配置的不一样 跑样的结果也会不一样  还有跑样的时间也会影响
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19楼2013-11-27 16:11:16
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