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David勇

木虫 (小有名气)

[求助] sample buffer配方是不是会影响蛋白多聚体的裂解。

我在做a-syn的WB。分子量大概在19kD左右。因为有多聚体所以常常在30+，40+的位子有条带。别人文献中在19的位子条带很明显，但是我做出来19位子的条带却没有。30+，40+的位子倒挺明显的。是不是我的sample buffer有问题我的配方是1 M trisHcl6.8 0.6ml；50%甘油1ml；10%SDS 2ml；水6.4ml。加了sample buffer后100度加热10min。大家觉得问题可能出在哪里？
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1楼 2013-11-06 15:32:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-08 08:27:07
完全没有还原剂（巯基乙醇或者DTT）。如果形成分子间二硫键的话，多聚体不会解聚成单体。你的像是二聚体。
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2楼2013-11-07 06:34:41
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David勇

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-07 06:34:41
完全没有还原剂（巯基乙醇或者DTT）。如果形成分子间二硫键的话，多聚体不会解聚成单体。你的像是二聚体。

能把你含有巯基乙醇的配方和我说下吗？
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3楼2013-11-07 10:20:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-08 08:27:18
David勇: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 好的，谢谢，我试试看 2013-11-08 10:07:34
2X loading buffer: 125mM Tris pH6.8, 25% (v/v) glycerol, 4% SDS, 10% β-mercaptoethanol
我常用的是这个配方。缓冲体系的pH与浓缩胶相同。如果你喜欢DTT，一般用的tris的pH要在碱性范围。
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4楼2013-11-08 01:35:29
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