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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 两次体外转录所得的RNA，经电泳检测，大小不一样

以线性化DNA为模板进行体外转录，两次条件相同，但是转录出来的RNA大小不一样，是怎么个情况？
两次体外转录所得的RNA，经电泳检测，大小不一样
体外转录.jpg
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1楼 2013-11-03 21:55:59
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by machao8405 at 2013-11-04 16:04:35
胶浓度很低，被我捏的了...

问下哈
1，用的是什么胶，浓度多少，是跑完EB染色还是直接加胶里面的，跑用的什么电泳液
2，图1条带上方有一个浅浅的条带，看MARKer感觉跟第二张的是差不多长度的。你的DNA会不会没完全线性化，所以会转录出超长片段。把你的模板也跑下，看看有没有环状DNA吧。
3，RNA看似没降解，但是胶很脏有拖带，可能是RNA样品不纯。RNA电泳不同于DNA电泳，会受到杂质干扰的。。。
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22楼2014-08-14 10:13:11
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
machao8405(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-04 08:33:06
1个可能，rna降解了，据观察电泳中没有rna的完整3条带。2，电泳跑歪了（据我观察，图2的marker也歪了）
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
2楼2013-11-03 22:17:15
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machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-03 22:17:15
1个可能，rna降解了，据观察电泳中没有rna的完整3条带。2，电泳跑歪了（据我观察，图2的marker也歪了）

亲，我这个不是提取组织的RNA，完全没有弥散现象，所以，不要动不动就说降解的事儿
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3楼2013-11-03 22:19:31
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by machao8405 at 2013-11-03 22:19:31
亲，我这个不是提取组织的RNA，完全没有弥散现象，所以，不要动不动就说降解的事儿...

亲请看你图一的胶孔是多么的不齐，我觉得是这个原因。还有。体外转录系统里没有rna酶不代表不降解。。
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
4楼2013-11-03 22:34:39
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