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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳转化子菌落PCR产物，条带在槽里？
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林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-03 22:15:01
PCR体系还要具体讲啊，我也不知道你用的什么酶啊，是2x mix还是每个组分都独立的呢，这个你看酶的说明书就可以了啊...

好的。
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11楼2013-11-04 08:25:09
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-10-31 21:05:10
做菌落PCR不需要用KOD酶，KOD酶扩增能力不行，换taq酶PCR一次试试
同时注意：
1. 菌体量不能太大，太大扩不出来
2. 预变性时间延长至5min，这一步煮菌，释放DNA

我就只用枪头粘在管里面，然后预变性的时间都延长到十分钟，用的是primer star
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12楼2014-07-09 21:01:32
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zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:42:10
菌落PCR的模板很脏的，一般只用于鉴定。通常点样孔会有点亮。你的情况应该是没有P出来。菌落PCR完全没有必要用高保真酶，普通的taq就很好，扩增效率高而且便宜。

我的就是鉴定的10ul的体系， 点样孔里面也是很亮，用的是primer star 但是什么都P不出来
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13楼2014-07-09 21:02:41
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gyesang

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优秀版主优秀版主
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-07-09 21:02:41
我的就是鉴定的10ul的体系， 点样孔里面也是很亮，用的是primer star 但是什么都P不出来...

鉴定，不要用保真度那么高的酶，一般保真度好的酶扩增能力弱，建议你使用Taq酶试试
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
14楼2014-07-10 11:14:34
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