应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1907  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

彭艳prene

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建

本人做载体构建快半年了，载体是pcDNA3.1（-），大小5k左右，目的片段大小2.7k，我分为两段连，先将两段连到T载体上，测序验证没有问题，然后酶切，分别连到目的载体上，一段已经连上去了经酶切没有问题，但是另一段就是连不上去，卡在最后一步很久，跪求各位高人有类似经验的指导指导，小妮子不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-10-28 21:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wilzu

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 23:58:04
引用回帖:
5楼: Originally posted by 彭艳prene at 2013-10-29 14:51:33
是的，我自己命名A片段和B片段，A片段能连上去，连上去后双酶切验证和测序显示都没有问题，但再把B片段连上去时就有问题了，一直连不成功，有长克隆但挑出来抽质粒很奇怪，质粒大小居然比空载体的片段都小，请问这 ...

如果两段序列没有大的重复片段 实验设计合理 包括两端酶切位点在载体里都是单一 分步克隆应该不是难事 既然你已经把两段都已经克隆到t载体 为什么不直接p出或直接酶切出完整序列 再
装到表达载体里

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-29 23:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

wilzu

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-29 01:11:57
是双酶分步克隆到pcdna3.1的mcs ,两个片段两端都有设计酶切位点？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-28 23:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-29 01:12:30
酶切后有没有电泳鉴定一下结果，如果胶回收的话，回收率又是多少？你的连接体系有没有问题？还有难连接的话，连接时间可以延长一些
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-28 23:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 16:36:51
你可以先在T载体上构建好含有两个片段，最后再转到目的载体上！
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-29 11:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 22:18 by xxniao123
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +8 Kittylucky 2026-08-27 8/400 2026-08-27 18:33 by raiy123
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭