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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ProteinA/G 纯化蛋白
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] ProteinA/G 纯化蛋白

1.前两天为测试抗体拉目的蛋白的效价，先做了IP,beads用的是santa protein A/G PLUS Agarose 拉到目的蛋白的结果很好。
2.老板让我就用这种方法大量纯化蛋白，不知是否可行，那后期目的蛋白如何跟抗体分开呢，不知是否有虫友听过或者用过此法。小虫愚陋，愿闻其详。
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1楼 2013-10-28 10:45:01
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2013-10-28 15:27:27
就是用非常多的细胞去做这个（实验需要这一特定蛋白）,不是指望这个方法一下子纯化出很多，就是想问问，用IP beads 拉到目的蛋白后，有没有方法将目的蛋白与其他成分分开来，达到纯化的目的...

当然有喽，你想想亲和层析怎么把目的蛋白从PROTEIN A上洗脱下来的，降低PH,然后需要一步分子筛分享目的蛋白，
为什么不用原核表达或真核表达呢
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星陈代谢
4楼2013-10-28 15:36:58
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大量纯化蛋白不太靠谱，哪有那么多的蛋白表达出来呢
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星陈代谢
2楼2013-10-28 15:07:56
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kx444555 at 2013-10-28 15:07:56
大量纯化蛋白不太靠谱，哪有那么多的蛋白表达出来呢

就是用非常多的细胞去做这个（实验需要这一特定蛋白）,不是指望这个方法一下子纯化出很多，就是想问问，用IP beads 拉到目的蛋白后，有没有方法将目的蛋白与其他成分分开来，达到纯化的目的
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3楼2013-10-28 15:27:27
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kx444555 at 2013-10-28 15:36:58
当然有喽，你想想亲和层析怎么把目的蛋白从PROTEIN A上洗脱下来的，降低PH,然后需要一步分子筛分享目的蛋白，
为什么不用原核表达或真核表达呢...

因为我后期想要分析它的结构什么，所以需要的是未经处理的天然结构的蛋白
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5楼2013-10-28 15:51:54
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