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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 平末端加A尾连接T载体的问题
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redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
11楼2016-07-10 02:23:00
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、目前做过的是2k左右目的片段连载体，一般情况回收较好，连接比例适合基本没问题
2、连接时，一般是16℃5h甚至过夜更长的时间
3、平端连接一般就是保证回收效果及加大回收量，感觉运气成分多。
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12楼2016-07-11 14:16:22
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liangpz

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-09-08 17:06:20
我们用的克隆材料就不用加A什么的，直接TAQ酶的PCR后，回收连接，做过1.5Kb的连接，长片段较短片段转化率确实是低点儿。

求助层主！~~
直接Taq酶加A的原理是什么呢，就是又进行了PCR？那之前本来高保真酶保真性很好，结果在加A这一步不是又增加碱基突变的几率了？
因为我在做表达，用高保真酶就是为了构建的表达载体上的片段没有碱基突变，不知道层主的方法会不会增加突变风险？
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13楼2016-10-21 21:04:13
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兴在——

新虫 (初入文坛)
请问楼主后来怎样了？成功了吗？因为近期我也做平末端克隆~请教下
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14楼2018-10-20 15:11:19
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丽媛FOOD

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huoyongting at 2013-10-29 16:35:22
回收是必须的，但是我觉得没必要跑胶，直接用纯化柱回收就好了，小片段挂不上柱，我做过N次了，没问题...

你好，请问加完A尾后，直接回收，用纯化柱回收，你一般选用的是什么样的纯化柱进行回收呢？
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认真地对待，真诚的生活，快乐的感受。
15楼2019-01-20 20:47:13
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