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redrover

禁虫 (小有名气)

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11楼2016-07-10 02:23:00
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1、目前做过的是2k左右目的片段连载体,一般情况回收较好,连接比例适合基本没问题
2、连接时,一般是16℃5h甚至过夜更长的时间
3、平端连接一般就是保证回收效果及加大回收量,感觉运气成分多。
12楼2016-07-11 14:16:22
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liangpz

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-09-08 17:06:20
我们用的克隆材料就不用加A什么的,直接TAQ酶的PCR后,回收连接,做过1.5Kb的连接,长片段较短片段转化率确实是低点儿。

求助层主!~~
直接Taq酶加A的原理是什么呢,就是又进行了PCR?那之前本来高保真酶保真性很好,结果在加A这一步不是又增加碱基突变的几率了?
因为我在做表达,用高保真酶就是为了构建的表达载体上的片段没有碱基突变,不知道层主的方法会不会增加突变风险?
13楼2016-10-21 21:04:13
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兴在——

新虫 (初入文坛)

请问楼主后来怎样了?成功了吗?因为近期我也做平末端克隆~请教下
14楼2018-10-20 15:11:19
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丽媛FOOD

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by huoyongting at 2013-10-29 16:35:22
回收是必须的,但是我觉得没必要跑胶,直接用纯化柱回收就好了,小片段挂不上柱,我做过N次了,没问题...

你好,请问加完A尾后,直接回收,用纯化柱回收,你一般选用的是什么样的纯化柱进行回收呢?
认真地对待,真诚的生活,快乐的感受。
15楼2019-01-20 20:47:13
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