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bayu18

新虫 (正式写手)

[求助] 荧光显微镜

我用荧光显微镜拍摄植物荧光照片,发现同一部位在低曝光值(200ms)和高曝光值(1s)时荧光的颜色有点不同,这是什么原因?哪一个才是比较准确的?
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-10-25 08:47:19
bayu18: 金币+2, 有帮助 2013-10-25 09:38:01
不同样品的荧光强度不一样,所以需要的曝光时间各不相同。合适的曝光时间,以能看清所需要的细节为宜,在此前提下曝光时间越短越好。过长的曝光时间成像容易模糊,并且容易使样品荧光淬灭。
另外,如果同时有多种荧光蛋白,过强的曝光时间可能导致其他颜色的荧光也显现出来。我自己就同时拍过带红色和绿色荧光的样品,本来滤光片用的是绿色荧光的,结果红色荧光蛋白表达太强,看绿色荧光时竟然也同时能看到红色。
楼主的图片我看是亮度的问题,不用纠结颜色,哪个更能清楚显示你要拍的部位,就选哪一个。现在大部分显微镜拍出来的其实都是黑白图像,颜色都是软件根据设置加上去的伪色,并且可以更改的,所以不要在意颜色啦。
楼主先弄清楚自己需要看的地方是哪里,然后再根据上面说的调节曝光时间就可以了。原则其实就一个:看清你需要的细节。
10楼2013-10-24 21:03:50
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bayu18

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lionllp at 2013-10-23 17:15:58
根据那个技术员说的可以看出,你的第一张图片曝光过度。图片中红色小点有6、7处。在显微镜的曝光设置中调一下。我们的是技术员调好的,就是确定一个点,刚开始出现红色为最佳。(最多一个红点并且很小)。第二张就 ...

那几个红点是其他物质的荧光,是本来就有的
8楼2013-10-23 19:13:26
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普通回帖

lionllp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
肯定颜色有不同了,之前我们买了蔡司显微镜,那个培训的技术员说:要高品质的图片,曝光时间就比较长。你可以参考一下!
科研路漫漫,与君共相伴!
2楼2013-10-23 11:10:44
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bayu18

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lionllp at 2013-10-23 11:10:44
肯定颜色有不同了,之前我们买了蔡司显微镜,那个培训的技术员说:要高品质的图片,曝光时间就比较长。你可以参考一下!

颜色不同的原因是什么?谢谢!!
3楼2013-10-23 13:26:15
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these119

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是颜色怎么个不同,要是只是亮暗的差别,那很明显是曝光时间导致的。要是明显是两种颜色,有两种原因,第一种是过分曝光,导致颜色变化;第二种是显微镜的滤片设置
4楼2013-10-23 15:36:58
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lionllp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


bayu18: 金币+1 2013-10-23 16:20:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by bayu18 at 2013-10-23 13:26:15
颜色不同的原因是什么?谢谢!!...

上次听那个技术员说,普通的显微镜是透射光源,而荧光是由一个激发光投射到荧光染料上,荧光再反射回目镜的。曝光时间不同,颜色也应该不同。具体我也解释不清,我也是外行,仅供参考,看看其他虫友的解释。
科研路漫漫,与君共相伴!
5楼2013-10-23 15:39:20
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bayu18

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by these119 at 2013-10-23 15:36:58
你是颜色怎么个不同,要是只是亮暗的差别,那很明显是曝光时间导致的。要是明显是两种颜色,有两种原因,第一种是过分曝光,导致颜色变化;第二种是显微镜的滤片设置

这是我的两张同一部位在不同曝光值下的荧光照片(其他都相同,只是曝光值不同),你能解析一下颜色变化是由于哪种原因么?
荧光显微镜
CK20倍-曝光1s.jpg


荧光显微镜-1
CK20倍-曝光200ms.jpg

6楼2013-10-23 15:43:05
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lionllp

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bayu18 at 2013-10-23 15:43:05
这是我的两张同一部位在不同曝光值下的荧光照片(其他都相同,只是曝光值不同),你能解析一下颜色变化是由于哪种原因么?

CK20倍-曝光1s.jpg

CK20倍-曝光200ms.jpg
...

根据那个技术员说的可以看出,你的第一张图片曝光过度。图片中红色小点有6、7处。在显微镜的曝光设置中调一下。我们的是技术员调好的,就是确定一个点,刚开始出现红色为最佳。(最多一个红点并且很小)。第二张就有点暴光不足。一般显微镜都是设置好的,我们的显微镜软件有自动曝光按钮,用着就比较方便。你可以试着再调调。
科研路漫漫,与君共相伴!
7楼2013-10-23 17:15:58
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
bayu18: 金币+1, 有帮助 2013-10-25 09:38:21
显然第一张曝光时间太长了,荧光拍照的曝光时间,主要就是背景得保证是黑的。
9楼2013-10-24 09:43:27
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