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shan-sa

金虫 (正式写手)

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[求助] 植物表达蛋白，能看到荧光，westernblot 却杂不出来，为什么？

在植物体中，表达了一个融合GFP的蛋白，看荧光是有的，然后取样做western，却杂不出来，阳性对照能杂出来，请问大家有没有遇到这种情况？
我把头皮想破了还是想不出为什么....谢谢！

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蛋白质生物学实验经验

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1楼 2013-10-22 10:03:39

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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-10-23 10:38:19

最可能的一种情况，目的蛋白质与GFP共价连接后的新的蛋白质的空间结构发生了改变，GFP那部分还是天然构象，但是目的蛋白的表位因为目地蛋白质折叠异常或者因为GFP形成的空间位阻使得抗原表位被遮盖。可以用蛋白质的三维结构预测软件预测一下目的蛋白质与GFP共价连接后的新的蛋白质的空间结构，看看目的蛋白质的构象与天然构象是不是发生了改变。

目的蛋白质与GFP共价连接之间的肽链也该是数个亲水的氨基酸残基，这样对于目的蛋白质与GFP各自的折叠影响较小。