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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PGEX-4T-1载体表达产物，GST标签的切除
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 18:46:35
引用回帖:
10楼: Originally posted by 475502411 at 2013-10-17 13:32:21
哦，是的，这也是一个方法，を试一下，但是还是想知道能不能买到带标签的thrombin。这样酶切以后再过柱就可以得到干净的目的蛋白了...

你可以直接用thrombin柱上酶切，或者纯化后酶切。至于去除thrombin的影响，你可以根据你的目的条带的大小超滤应该就能去除thrombin的影响。
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
11楼2013-10-17 16:02:09
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 0624410024 at 2013-10-17 15:02:09
你可以直接用thrombin柱上酶切，或者纯化后酶切。至于去除thrombin的影响，你可以根据你的目的条带的大小超滤应该就能去除thrombin的影响。...

我的目的蛋白的大小是52KD，thrombin大小是30多。可以吗？求指教
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
12楼2013-10-18 08:50:46
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-20 18:22:19
引用回帖:
12楼: Originally posted by 475502411 at 2013-10-18 08:50:46
我的目的蛋白的大小是52KD，thrombin大小是30多。可以吗？求指教...

那就用thrombin不好办了，要不你就用IMPACT Kit试剂盒，IMPACT表达的目的蛋白通过与蛋白自剪接元件intein，连接几丁质结合蛋白域（CBD）形成融合蛋白，通过几丁质柱亲和纯化融合蛋白。在特定的条件下，诱导内含肽的肽键裂解活性，将目标蛋白释放出来，而内含肽与几丁质结合蛋白仍结合在几丁质纯化介质上，达到单柱分离纯化蛋白的目的。而且，最终得到目的蛋白上不会残留多余的氨基酸。只是这个系统成本较高。
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
13楼2013-10-18 12:43:14
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梦想很重要

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
14楼2013-10-18 13:38:50
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 0624410024 at 2013-10-18 11:43:14
那就用thrombin不好办了，要不你就用IMPACT Kit试剂盒，IMPACT表达的目的蛋白通过与蛋白自剪接元件intein，连接几丁质结合蛋白域（CBD）形成融合蛋白，通过几丁质柱亲和纯化融合蛋白。在特定的条件下，诱导内含肽的 ...

谢谢，这个估补行，成本太高了，做出来公司也不会通过的
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
15楼2013-10-20 15:34:15
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 梦想很重要 at 2013-10-18 12:38:50
去除凝血酶有很多办法啊，不一定要有标签，后续有分子筛，离子交换，液相色谱 都可以啊

我的蛋白是52K，血红素是39K，用分子筛不好办啊。还有就是我要的蛋白要有一定的浓度，过完分子筛估计浓度就不行了
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
16楼2013-10-20 15:36:23
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