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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 要确定一瓶未知菌液中含有何菌种，具体的实验步骤？
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寒心飞影

金虫 (正式写手)

[求助] 要确定一瓶未知菌液中含有何菌种，具体的实验步骤？

我对有关微生物的知识不太了解，希望好心人士帮帮忙，最好具体点，万分感谢。
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1楼 2013-10-12 10:38:39
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-10-12 23:53:42
这个瓶子里是纯种菌or混合菌？如果是纯菌的话。首先，你应该可以看出是细菌or真菌吧。细菌可以直接菌P，使用通用引物。真菌，你得提一下基因组，然后使用真菌的通用引物进行PCR。将产物连接T载体，转化大肠感受态细胞，挑转化子测序，进行blast，可以找到相似度最高的种属。
细菌通用引物觉得21F和1492R不错，产物长度大概1471bp；真菌通用引物可以使用ITS1和ITS4，产物长度大概500~750bp。
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2楼2013-10-12 11:58:11
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寒心飞影

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2013-10-12 11:58:11
这个瓶子里是纯种菌or混合菌？如果是纯菌的话。首先，你应该可以看出是细菌or真菌吧。细菌可以直接菌P，使用通用引物。真菌，你得提一下基因组，然后使用真菌的通用引物进行PCR。将产物连接T载体，转化大肠感受态细 ...

瓶子里是混合菌，怎么鉴定呢？
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3楼2013-10-12 18:32:17
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 寒心飞影 at 2013-10-12 18:32:17
瓶子里是混合菌，怎么鉴定呢？...

多挑几个转化子，做个克隆文库
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4楼2013-10-12 23:26:37
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wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个就需要你把瓶子里面的菌图到固体培养皿上，然后跳出生长的单菌落，不断的纯化，直到没有杂菌，细菌做16s rDNA真菌 做18S去测序鉴定是什么菌，具体细菌培养基ＬＢ真菌ＰＤＡ，酵母ＹＰＤ配方网上都可以找到的
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对于誓言一定要实现。
5楼2013-10-13 14:36:58
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