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寒心飞影

金虫 (正式写手)

[求助] 要确定一瓶未知菌液中含有何菌种,具体的实验步骤?

我对有关微生物的知识不太了解,希望好心人士帮帮忙,最好具体点,万分感谢。
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助! 2013-10-12 23:53:42
这个瓶子里是纯种菌or混合菌?如果是纯菌的话。首先,你应该可以看出是细菌or真菌吧。细菌可以直接菌P,使用通用引物。真菌,你得提一下基因组,然后使用真菌的通用引物进行PCR。将产物连接T载体,转化大肠感受态细胞,挑转化子测序,进行blast,可以找到相似度最高的种属。
细菌通用引物觉得21F和1492R不错,产物长度大概1471bp;真菌通用引物可以使用ITS1和ITS4,产物长度大概500~750bp。
2楼2013-10-12 11:58:11
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寒心飞影

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2013-10-12 11:58:11
这个瓶子里是纯种菌or混合菌?如果是纯菌的话。首先,你应该可以看出是细菌or真菌吧。细菌可以直接菌P,使用通用引物。真菌,你得提一下基因组,然后使用真菌的通用引物进行PCR。将产物连接T载体,转化大肠感受态细 ...

瓶子里是混合菌,怎么鉴定呢?
3楼2013-10-12 18:32:17
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 寒心飞影 at 2013-10-12 18:32:17
瓶子里是混合菌,怎么鉴定呢?...

多挑几个转化子,做个克隆文库
4楼2013-10-12 23:26:37
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wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个就需要你把瓶子里面的菌图到固体培养皿上,然后跳出生长的单菌落,不断的纯化,直到没有杂菌,细菌做16s rDNA真菌 做18S去测序鉴定是什么菌,具体细菌培养基LB真菌PDA,酵母YPD配方网上都可以找到的
对于誓言一定要实现。
5楼2013-10-13 14:36:58
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