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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-10-14 21:35:20
但是含该质粒的菌是非甲基化的...

你用的是什么大肠杆菌菌株？
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tiankong很蓝
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
11楼2013-10-15 10:15:45
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by gyesang at 2013-10-15 10:15:45
你用的是什么大肠杆菌菌株？...

我也不清楚，只知道该菌是非甲基化的。难道位点是否被甲基化不仅与菌株是否是非甲基化有关，还与该菌株的种类有关？只知道该菌株是非甲基化的不行吗？请指教
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
12楼2013-10-22 10:44:50
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gyesang

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引用回帖:
12楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-10-22 10:44:50
我也不清楚，只知道该菌是非甲基化的。难道位点是否被甲基化不仅与菌株是否是非甲基化有关，还与该菌株的种类有关？只知道该菌株是非甲基化的不行吗？请指教...

那是没有问题的啊，应该可以切开的啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
13楼2013-10-22 22:54:54
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-29 18:18:48
这种情况也遇到过。我师弟构建了一个载体，有一个XbaI酶切位点。用另外一个酶单酶切大小正好是载体与插入片段的加和，但是用XbaI就是切不动，后来测序发现确实是连上了，并且XbaI酶切位点序列也是正确的，我们用的宿主是DH5α，希望这些经验对你有帮助~~~
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14楼2013-10-23 10:50:13
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jinying1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-10-14 21:35:20
但是含该质粒的菌是非甲基化的...

用去甲基化的感受态转化后，能不能被XbaI切开了么？试过了么
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15楼2014-11-13 16:02:04
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jinying1123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2013-10-23 10:50:13
这种情况也遇到过。我师弟构建了一个载体，有一个XbaI酶切位点。用另外一个酶单酶切大小正好是载体与插入片段的加和，但是用XbaI就是切不动，后来测序发现确实是连上了，并且XbaI酶切位点序列也是正确的，我们用的宿 ...

DH5a是去甲基化的感受态么
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16楼2014-11-13 16:03:59
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chun828

铜虫 (初入文坛)
XbaI位点后紧邻的碱基是TC时，即序列为TCTAGA TC时，XbaI 位点的甲基化（Dam甲基化）那么该序列的甲基化将不会被切开！
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阅读经典，成就智慧
17楼2014-11-14 22:48:31
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464374253

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jinying1123 at 2014-11-13 16:03:59
DH5a是去甲基化的感受态么...

不是的
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18楼2015-10-12 20:08:14
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464374253

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by jinying1123 at 2014-11-13 16:02:04
用去甲基化的感受态转化后，能不能被XbaI切开了么？试过了么...

我的就是这个样子  切不开
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19楼2015-10-12 20:09:34
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wang0371

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

谢谢各位的回复，我也学习了

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基于青睐有准备的人
20楼2015-10-13 23:38:02
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