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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 畜牧兽医 » 求助----原核表达问题：实际表达的蛋白大小与预测的相差较大
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niu.bi

木虫 (文坛精英)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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51楼2013-10-11 08:18:10
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seeforme

新虫 (知名作家)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
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53楼2013-10-11 08:19:14
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火柴头儿

金虫 (小有名气)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
我也遇到了和你一样的问题
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56楼2013-11-27 14:21:06
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loveerobin

木虫 (职业作家)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
会不会是翻译提前终止了
应该是序列有问题吧
把连接在表达载体上的序列测全了，最好测个重复
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57楼2013-11-28 15:32:17
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
57楼: Originally posted by loveerobin at 2013-11-28 15:32:17
会不会是翻译提前终止了
应该是序列有问题吧
把连接在表达载体上的序列测全了，最好测个重复

谢谢。蛋白编码出错，截取序列的起始位点不是从完整的aa开始的，序列编码混乱。
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59楼2013-11-29 08:23:18
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by longanzz at 2013-10-10 15:17:28
你先看看你的阅读框有没有移位，链接到载体上看看有没有提前终止的，如果这些都没有问题的话，在考虑表达的问题。

，确实是移位了，从头再来，谢谢
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60楼2013-11-29 08:24:24
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
50楼: Originally posted by sayaya at 2013-10-11 08:15:06
你的蛋白是不是由两条分子量近似的亚基组成啊，表达后以亚基状态存在。

谢谢
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61楼2013-11-29 08:24:41
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uandme1

新虫 (初入文坛)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
楼主你好！你的问题解决的了没，全长有没有表达出来？怎么解决的？我现在也是遇到这种问题，预计要表达的蛋白51KDa,现在表达出来总是30左右，测序基因和读码框都没错，很郁闷。
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63楼2013-12-29 12:01:03
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
63楼: Originally posted by uandme1 at 2013-12-29 12:01:03
楼主你好！你的问题解决的了没，全长有没有表达出来？怎么解决的？我现在也是遇到这种问题，预计要表达的蛋白51KDa,现在表达出来总是30左右，测序基因和读码框都没错，很郁闷。

你好。由于所截取的mRNA序列不是“3”的整倍数，导致所扩增的序列在蛋白表达时比较混乱，提前出现终止密码子。可以重新选取模板序列，模板前面的部分为“3”的整倍数，这样才能正确表达。
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64楼2013-12-31 19:41:24
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211华仔

银虫 (小有名气)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
有时候在处理蛋白过程中，蛋白会断裂的，建议做过WESTERN blot试试
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65楼2014-05-04 11:59:18
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木虫/panda

木虫 (知名作家)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
帮顶一个
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66楼2014-05-04 19:36:46
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小贝贝。

新虫 (初入文坛)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
可以考虑重做

发自小木虫Android客户端
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68楼2017-06-28 08:52:37
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030Selma

金虫 (正式写手)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
你的目的蛋白掉了，只剩下一段了？而且你怎么确定20多那个是你的？

发自小木虫IOS客户端
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69楼2017-06-28 20:59:43
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
找到原因了吗？我最近原核表达，比预测小了10KDa左右，不知道什么原因？以前没有遇到过。
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70楼2019-09-27 16:03:26
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简单回复
zhoupeng8752楼
2013-10-11 08:18   回复  
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
·
miaojiabing54楼
2013-10-11 08:20   回复  
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
天涯201255楼
2013-10-11 08:22   回复  
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
zh1024658楼
2013-11-28 23:32   回复  
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
蓝皮鼠798362楼
2013-11-29 13:03   回复  
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
jiangronglu67楼
2014-08-25 16:12   回复  
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