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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 畜牧兽医 » 求助----原核表达问题：实际表达的蛋白大小与预测的相差较大
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助----原核表达问题：实际表达的蛋白大小与预测的相差较大

本人做原核表达开始还比较顺利，从目的基因扩增到表达载体的构建等一步步走过来，到蛋白表达，期间做了几次都没有成功，目的条带预计是50kda左右，而实际表达蛋白经蛋白电泳20左右，所构建的原核表达载体测序正确，不知道可能会是什么原因？求各位帮忙指教！！
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1楼 2013-10-10 10:33:14
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
63楼: Originally posted by uandme1 at 2013-12-29 12:01:03
楼主你好！你的问题解决的了没，全长有没有表达出来？怎么解决的？我现在也是遇到这种问题，预计要表达的蛋白51KDa,现在表达出来总是30左右，测序基因和读码框都没错，很郁闷。

你好。由于所截取的mRNA序列不是“3”的整倍数，导致所扩增的序列在蛋白表达时比较混乱，提前出现终止密码子。可以重新选取模板序列，模板前面的部分为“3”的整倍数，这样才能正确表达。
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64楼2013-12-31 19:41:24
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)
★
秦运杰223(金币+1): 谢谢参与
你先看看你的阅读框有没有移位，链接到载体上看看有没有提前终止的，如果这些都没有问题的话，在考虑表达的问题。
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11楼2013-10-10 15:17:28
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